Разное

Xray concept лада: Почему серийная «Лада XRAY» не похожа на концепт-кар 2012 года

Содержание

Почему серийная «Лада XRAY» не похожа на концепт-кар 2012 года

Концепт был лучше! АвтоВАЗ всё испортил! Подобными комментариями несколько лет назад встретили предсерийный вариант хэтчбека «Лада XRAY». Почему серийная модель оказалась не похожа на эффектный концепт образца 2012 года и могло ли получиться иначе?

Современные модели «Лада Веста» и «Лада XRAY» вполне по праву находятся на верхних строчках хит-парада продаж в России. Создатели пошли по пути ведущих мировых производителей: связали разные модели общей дизайнерской стилистикой, под которую скоро «причешут» и «Гранту». И начинался этот процесс с концепт-каров, сначала поисковых, «общих», а потом и предсерийных.

Так что же представляют из себя эти красочные машины за традиционной стеклянной оградой и почему всё-таки стоит изучить информацию о концепте, а не включать «синдром Хатико» и страдать по «обманутым ожиданиям»?

Концепт-кар Lada XRAY, 2012 год

История современного вазовского стиля стартует в 2011 году, когда на АвтоВАЗ под начало президента Игоря Комарова пришёл титулованный британский дизайнер Стив Маттин, к тому моменту подаривший миру несколько автомобилей Volvo и Mercedes-Benz, включая легендарные модели SLR McLaren и Maybach. И уже через год, в августе 2012 года, на Московском автосалоне представили первый плод работы Маттина — Lada XRAY Concept.

Задача этой машины — продемонстрировать общую стилистику будущих моделей, о чём сам Маттин говорил в интервью. Не выкатить перспективную серийную машину, а показать, в каком ключе будут развиваться «Лады»! Ну а кроме того, концепт позволил АвтоВАЗу закрепить за собой первенство с икс-образным дизайном передка, ведь уехавший из Тольятти в Mitsubishi дизайнер примерно в то же время корпел над «апгрейдом» визуального языка японской марки в том же ключе.

Естественно, представить новые дизайнерские идеи нужно в лучшем свете, и концепт с этим прекрасно справился. Замысловатые формы, сложный рисунок светодиодной светотехники, дорогие материалы отделки салона и многое другое. Никак не хуже, чем у других. Да и создавался макет по тем же технологиям, что и концепты Honda, Subaru, Kia, Hyundai, Porsche. И делали выставочный образец те же люди — специалисты итальянской студии Vercamodel Saro.

Сотрудники компании Vercamodel Saro у концепт-кара Lada XRAY, 2014 год

Если при взгляде на концепт кажется, что это почти готовая машина, просто «принаряженная» к выставке, значит, обман удался. Конструкция здесь совсем другая. Начинается всё с пенопластовой болванки на тележке с простым каркасом. От неё, как от заготовки скульптуры, отсекают всё лишнее… нет, не скульпторы, а точные пятикоординатные станки.

Потом вырезаются внутренние полости, включая пространство салона, в котором появляются сиденья на каркасе серийных, но заново обитые поролоном и кожей, а также передняя панель и обивки из модельной пены, обтянутые «притворяющейся» пластиком плёнкой. Стёкла на поверку совсем не стёкла, а плексиглас, да и внешние кузовные панели с металлом не знакомы: они выполнены из стеклопластика. Диски в буквальном смысле «слепили из того, что было»: у обычного диска срезают лишние части, а сверху лепят новый дизайн из модельного полимера.

Интерьер концепта Lada XRAY, 2012 год

А фары-то какое загляденье! Только это и не фары вовсе, а декоративные фонарики из светодиодов и матового пластика, созданные только для того, чтобы красиво светиться, но ни в коем случае не светить. Тем, кто хотя бы время от времени заглядывал в школу, понятно, что такая конструкция по определению не способна дать правильную светотеневую границу, а просто светит равномерно во все стороны.

Имитация фар на концепте

А как оно ездит? Да примерно так же, как светят «фары». По силовому агрегату здесь тоже сплошная унификация: маломощный электромотор в компании с механической коробкой да свинцово-кислотные аккумуляторы. Всё это нужно только для того, чтобы не пришлось каждый раз таскать макет руками.

Подвески в привычном понимании вообще нет, то есть здесь отсутствуют упругие элементы. Спереди, правда, есть телескопический элемент, похожий на амортизатор, но предназначен он всего лишь для изменения клиренса, чтобы можно было и спорткар сымитировать, и кроссовер. Сзади тем же самым заведуют пластины с прорезями и болты. «Фольксвагены» да «Шкоды», говорите, нынче жёсткие? Это вы ещё на концепт-карах не ездили.

Если бы концепт Lada XRAY 2012 года предназначался к выходу в серию с неизменным дизайном, автомобиль не потерялся бы на фоне лучших образцов мирового автопрома. Но ему такой судьбы изначально не готовили, не желая даже задумываться (а тем более объявлять) о том, с какой платформой можно его «подружить», какими моторами оснастить и когда запускать. В то время АвтоВАЗ считали производителем очень простых и, соответственно, дешёвых машин с качеством комплектующих в режиме свободного плавания, и столь резкий скачок в плане класса и цены без вариантов остался бы непонятым. Машина бы воспринималась как очередные «Жигули», но в другой оболочке, и просто не разошлась бы тем тиражом, который необходим для рентабельности производства. К тому же, это был трёхдверный «зализанный» хэтчбек, что ещё больше ограничивало возможную целевую аудиторию. И что делать? Идти вверх постепенно! И начать это движение предстояло двум будущим серийным автомобилям, наделённым новой дизайнерской ДНК…

Концепт-кар Lada Vesta, 2014 год

По плану, пойти в серийное производство они должны были в сентябре 2015 года и феврале 2016 года. Но в августе 2014 года проходил очередной Московский автомобильный салон, и на нём вазовцы решили показать новые модели, ведь на 2015 год крупных выставок не планировалось. И, так как до конвейера машинам было ещё далеко, а показывать собранные по обходным технологиям полуфабрикаты себе дороже, к публике вышли предсерийные концепты Vesta и… XRAY (XRAY Concept 2, если точнее).

И тут у многих, что называется, сломался мозг: мол, как это так, два года назад показывали совсем другое. «Упрощение!» «Обман!» «Да я уже деньги накопил, чтобы тот купить!» А интервью, пресс-релизы и официальные ролики читать и смотреть, конечно же, никто не стал. Ну или про них забыли. Самое главное — название одинаковое, а что там официальные лица говорили, неважно.

Концепт-кар Lada XRAY, 2014 год

В этот раз выставлялись автомобили, изначально и предназначенные для серийного производства. «Веста» — «главное блюдо», абсолютно новая конструкция на своей собственной платформе Lada B, выросшей из прототипа ВАЗ-2116 (проект С). XRAY — ещё один «ребёнок» глобальной платформы В0, а точнее, переработка хэтчбека Sandero Stepway. Но это всё было впереди.

А под софитами выставки оказались ближайшие родственники концепта XRAY 2012 года, сделанные в той же мастерской Vercamodel по той же технологии, но по внешности практически идентичные будущим товарным экземплярам, за исключением тех же поправок: огромные диски и красивые гирлянды вместо рабочей светотехники. Именно поэтому вопросы «а где взять такую оптику?» и «почему они такие жадные, что не пустили эти фары в серию?» могут вызвать только улыбку.

В итоге, как мы знаем, обе модели успешно стартовали и хорошо продаются. И всё-таки, если бы серийному хэтчбеку подобрали другое название вместо имени XRAY, это помогло бы избежать синдрома Хатико?

Чтобы следить за автомобильными новостями, подпишитесь на наши каналы в Телеграме или Яндекс-Дзене.

Lada xray концепт и реальность

В 2012 году на Московской международной выставке был показан трехдверный концепт-кар от АВТОВАЗа под названием Lada XRAY. Внешность была принципиально новой для автомобилей Волжского завода.

В 2014 году на премьере в Москве Вазовцы показали пятидверный концепт-кар Lada XRAY 2. Он стал более похож на предсерийный образец. И честно говоря, намного красивее первого. Автомобиль имеет Икс образный дизайн: передняя оптика, противотуманки и решетка радиатора выполнены в виде буквы Икс, её видно и на боковых гранях дверей. Передние фары и задние фонари светодиодные в необычном для Ваза стиле. Выглядит все это достойно.

В 2016 году в продаже наконец-то появился серийный вариант машины. В итоге вид автомобиля стал значительно хуже концепта. Передняя оптика упрощена, правда имеет светодиодные дневные ходовые огни. Задние фонари не получили светодиодов. Литые диски на 16 дюймов выглядят несуразно в больших колесных арках, делая автомобиль непропорциональным. Автомобиль смотрится не так изящно и брутально, как его представляли на премьере в Москве.

В целом XRAY напоминает Рено Сандеро. На самом деле это один и тот же автомобиль, как это в случаи с Хёндай Солярис и Киа Рио. Но XRAY все же предпочтительней.

Его внешность интереснее, комплектации богаче, а цена дешевле своего «собрата», управляемость острее за счет других настроек электроуселителя руля. Интерьер выглядит привлекательнее, чем у Рено. Багажник ИксРея увеличен на 51 л. и составляет 361 литр против 320 литров у Рено Сандеро. Это не может не порадовать своих владельцев. Ведь данный автомобиль хорошо подходит для поездок на дачу. Этому сопутствует высокий клиренс в 195 мм. и комфортная энергоёмкая подвеска. А у Сандеро он составляет всего 155 мм.

В салоне Лады шумоизоляция немного лучше. Эргономика у обоих автомобилей схожа. Кнопку обогрева сидений Вазовцы поставили в слепой зоне между дверьми, как у Рено, что не очень удобно. Отсутствует подлокотник во всех комплектациях, нет регулировки руля по вылету, как это сделано в Лада Веста.

И все эти недочеты не могут поставить автомобилей лучше по всем позициям своего конкурента, но, тем не менее это прорыв для Волжского автозавода.

А как поведет себя автомобиль по качеству в дальнейшем – время покажет.

LADA XRAY (ЛАДА Икс-рей) — российский автомобиль малого класса, компактный высокий хетчбэк, выполненный в стиле SUV [1] . Выпускается российской компанией АвтоВАЗ на производственной площадке в Тольятти с декабря 2015 года и позиционируется как компактный кроссовер [2] .

В 2019 году появилось несколько новых модификаций модели LADA XRAY: лимитированая версия #CLUB: автомобиль оснащается тремя вариантами силового агрегата: первый объёмом 1,6 литра с механической коробкой передач, второй объёмом 1,8 литра также с механической коробкой передач и 1,8 литра с роботизированой коробкой передач. Специальные исполнения предусмотревоют такие опции как климат-контроль, обогрев ветрового стекла, датчики дождя и света, парктроник, глубокая тонировка стёкл. Модификация Instinct: глянцевые – крыша и корпуса наружних зеркал, чёрные колёсные диски.

Содержание

История создания [ править | править код ]

В августе 2012 года на Московском международном автомобильном салоне был показан трёхдверный концепт-кар кроссовера LADA XRAY Concept [3] . Над концептом работала команда под руководством нового шеф-дизайнера Стива Маттина, который взял за основу проект «Lada C-Cross» [ источник не указан 1045 дней ] . За экстерьер отвечал Евгений Ткачев, за интерьер — Николай Суслов. Руководитель проекта LADA XRAY — Олег Груненков [4] . Единичный экземпляр автомобиля был создан итальянской фирмой Vercarmodel Saro S.r.l. по проекту дизайн-студии LADA. Стоимость создания этого образца обошлось приблизительно в 1 миллион долларов [5] . Концепт демонстрировал планы по развитию нового визуального стиля для автомобилей LADA, а также развитие в сегменте внедорожников, кроссоверов и SUV [6] [7] . «XRAY» — это аббревиатура, состоящая из «X» — как обозначение пересечения (англ. crossover , в значении типа кузова автомобиля, смотри кроссовер), «R» от слова «Recreation» («отдых»), «A» от слова «Activity» («активность»), «Y» от слова «Your» («твой»), или «Young» («молодой») [8] .

Через два года на том же московском автосалоне был показан второй концепт — пятидверный LADA XRAY Concept 2, уже более близкий к образцу для серийного производства [9] .

Серийное производство модели началось 15 декабря 2015 года, в полном соответствии с графиком, о котором ранее сообщалось предприятием [10] . Автомобиль выпускается на производственной площадке в Тольятти. Старт продаж состоялся 14 февраля 2016 года.

В 2016 году были представлены концепты спортивной и вседорожной версий: LADA XRAY Sport Concept и LADA XRAY Cross Concept. Спортивная версия получила заниженный клиренс, «спортивную» настройку двигателя и подвески, а вседорожная версия наоборот получила увеличенный клиренс, а также обвес — накладки на нижнюю часть дверей, пороги, колёсные арки, бамперы, защищающие эмаль кузова на лёгком бездорожье [11] [12] .

Чем отличается концепт Лады Х Рей от серийной версии

Lada XRAY Concept 2

Изменения в задней части

Чем отличается концепт Лады Х Рей от серийной версии

Вернемся в прошлое, когда АвтоВАЗ удивил общественность представленным концепт-каром, получившим название Лада Х Рей. Концепт Лада Х Рей тогда был еще совсем не готов к серийному производству и показался довольно сырым, поэтому производитель продолжал упорную работу над созданием инновационного автомобиля, который мог бы открыть ему дверь в будущее.

Lada XRAY Concept 2

Уже через два года, после того, как были привлечены к проекту лучшие отечественные и зарубежные дизайнеры и инженеры, на автосалоне в Москве появился предсерийный вариант и снова общественность ахнула.

Можно было с первого взгляда понять, что изменилось, с тех пор как был продемонстрирован первый концепт новой Лады Х Рей. Производитель качественно подрехтовал капот, улучшил решетку радиатора Лада Х Ray, изменил оптику в сторону более крупного варианта и интегрировал противотуманки в бампер.

Изменения в задней части

Если спереди все свелось лишь к доработкам, то сзади машина была полностью переработана. Так случилось, что ставка была сделана не на роскошь предлагаемого концепта, а на серийность, поэтому все элементы были упрощены. Было решено убрать огромное количество хрома, увеличить пятую дверь, уменьшить размеры бампера и сменить фонари.

Герой плохих дорог? Чем вас удивит LADA XRAY Cross

Я и не подозревал, что совсем недалеко к западу от столицы берега Москвы-реки могут быть столь крутыми. Не Жигулевские утесы рядом с Тольятти, конечно, но тоже живописно. А главное, что проехать сюда я смогу на машине, которую до сих пор считал легковой. Потому что LADA XRAY Cross оказалась хотя и переднеприводным, но вполне себе боевым кроссовером.

Я помню автосалон в Москве, где публике впервые показали концепт LADA XRAY. Тогда «АВТОВАЗ» только-только вступил в альянс с Renault, и от предприятия ждали прорыва. Как минимум по части дизайна, так как главным творцом назначили именитого Стива Маттина, автора внешности многих «Мерседесов» и «Вольво».

Прорыв случился: мы увидели современный кроссовер со ставшими вскоре фирменными X-образными выштамповками на дверях и динамичным силуэтом. Но в серийное производство пошла совсем другая машина, внешне больше похожая на высокий хетчбэк, нежели на внедорожник.

Все дело в том, что автопроизводитель принял разумное решение использовать шасси от Renault Sandero: современное, в то же время простое и надежное. Но по своему происхождению – легковое. Или мне это только кажется?

Обрусевший

Мне на тест досталась удивительная машина, в которой нет ничего от традиционного советского автопрома. Шасси, как я уже говорил, позаимствовано у Renault (хотя и со значительными переделками, но об этом позже). Мотор мог бы быть полностью российским, но здесь локализованная у нас версия изначально японского двигателя от Nissan, работающего в паре с японским же вариатором.

Только кузов полностью отечественный, правда с дизайном от англичанина Стива Маттина. В общем, получается такой интернациональный проект, собранный на берегах Волги.

И собранный неплохо, по крайней мере в версии Cross. Помимо увеличенного дорожного просвета, эта модификация отличается накладками из черного пластика по низу кузова, которые, на мой взгляд, сильно улучшили визуальное восприятие машины.

Давайте буду честным. Обычный XRAY на вид вышел несколько странным. У него относительно высокая линия боковых стекол, отчего кажется, что двери слишком большие, а окна, наоборот, маленькие. Обзорности это не мешает, но внешность требует привыкания.

А у «Кросса» и колеса побольше, и за счет пластиковых накладок двери кажутся меньше. Такой XRAY мне определенно нравится больше и выглядит более «молодежно».

Еще важнее, что конструкторы, создававшие Cross, не просто увеличили дорожный просвет, но и существенно доработали переднюю подвеску, применив в ней решения, знакомые по «Весте». И такой подвеской в «Ладе» по праву могут гордиться.

Милый снаружи, серьезный внутри

В фирменном золотистом цвете «Янтарь» и на больших 17-дюймовых колесах XRAY выглядит эдаким веселым зверьком, с которым так и хочется поиграть. Но внутри все смотрится основательнее. Посадка неожиданно внедорожная, ну или по крайней мере свойственная кроссоверам: сидишь высоко, а не полулежа, как в обычных легковушках. А вот подушка сиденья могла бы быть и подлиннее.

Массивная панель приборов из черного, простого, но аккуратного пластика также настраивает на серьезный лад. С одной стороны, по фактуре материал, из которого она сделана, выглядит «дешевле» чем в «Весте», с другой – в хорошем смысле утилитарно. Есть даже подлокотник, но он присутствует не во всех комплектациях.

Приборы и органы управления напоминают салон LADA Vesta, но расположение отдельных кнопок необычно – сказываются французские корни.

На центральной панели – новая фирменная мультимедиа EnjoY PRO, про которую мы уже подробно рассказывали. Так что диктую голосовому помощнику Алисе адрес, включаю музыку – и в путь.

По паспорту XRAY Cross с этим сочетанием 113-сильного двигателя и вариатора проигрывает «Весте» с тем же мотором в динамике, но мне показалось, что этот золотистый автомобиль более живо реагирует на нажатие педали газа. По крайней мере в городе он, по ощущениям, едет чуть азартнее – должно быть, инженеры выбрали иные настройки. Но спорткаром от этого, конечно, не становится: хотите больше мощи, берите версию с 1.8 на «ручке».

И управляется машина достойно. Еще Vesta Cross удивила меня тем, что при таком высоком дорожном просвете она ведет себя абсолютно как легковой автомобиль. XRAY Cross воспринимается чуть иначе, скорее как компактный кроссовер со спортивными настройками шасси, но и он не досаждает кренами и лишней валкостью.

В городе это то, что нужно: высокая посадка обеспечивает хорошую обзорность и прекрасное чувство габаритов, а в меру острое рулевое управление позволяет уверенно маневрировать в потоке. Получается почти идеальное сочетание качеств компактного хетчбэка и кроссовера, на котором можно не бояться высоких бордюров – хороший выбор, например, для начинающих водителей.

На извилистой загородной дорожке XRAY Cross также чувствует себя в своей стихии – мне понравилось, что рулевое управление в нем по современным меркам очень информативное. А вот на скоростном шоссе вроде «платника» Москва-Питер особого удовольствия не испытываешь: тут мотора уже не хватает, да и высокий кузов делает машину чувствительной к порывам ветра.

На высокой скорости ветер становится слышен и в казавшемся до этого тихом салоне. В общем, та же Vesta в любой из своих версий на роль «гран туризмо» подходит больше.

Прочь с асфальта!

Зато XRAY Cross действительно готов дать бой любому переднеприводному кроссоверу на бездорожье! Именно кроссоверам, а не легковым машинам с увеличенным дорожным просветом.

В отличие от «Весты Кросс» тут не только высокий дорожный просвет аж в 215 миллиметров (это больше, чем под мостами «УАЗа»!), но и короткие свесы кузова, так что чтобы повредить бамперы, нужно очень сильно постараться.

Плюс у подвески вполне приличные рабочие ходы, так что оторвать одно из колес совсем непросто. Но даже если такое случится, то с задним, ведомым колесом: передние ведущие сохранят сцепление с дорогой и XRAY Cross продолжит свой путь. Мне показалось, что и система стабилизации тут лучше, чем в «Весте», помогает на скользком покрытии, подтормаживая буксующее колесо, но, возможно, дело в развесовке, работающей в пользу передка.

Не танк, конечно, но именно что кроссовер, причем проходимее многих. Съезжать с асфальта можно смело, а на соответствующей резине машине и внезапный сильный снегопад не будет страшен.

В итоге XRAY Cross оказывается почти что уникальным предложением на рынке. По большому счету более крупным переднеприводным кроссоверам B-сегмента, которые в последние годы у нас так популярны, он уступает только в размере. Признаюсь честно, задние сиденья в этой «Ладе» довольно тесные и по простору проигрывают и «Весте», хотя с багажником тут полный порядок.

При этом стоит XRAY Cross чуть ли не вдвое дешевле этих самых чуть более крупных кроссоверов. И из его прямых конкурентов можно вспомнить разве что все тот же Renault Sandero Stepway. Но «француз» все же немножко дороже, у него проще комплектации, да и подвеска лишена тех полезных доработок, которым подверглась отечественная машина. К тому же на «Ладу» ставят более мощные двигатели, хотя вариант с 1,6-литровым 113-сильным мотором и вариатором у Sandero тоже есть.

В общем, учитывая растущую любовь соотечественников к кроссоверам и подорожание более крупных автомобилей, можно прогнозировать появление на рынке большего числа таких вот компактных моделей. И у «Лады» в этом сегменте, получается, уже неплохие позиции.

пугать детей или удивлять мир? — Автоновости Перми

Вот и показали. На огромном вертящемся подиуме, с вычурной сиреневатой подсветкой боков цвета бронзы и пафосной речью на Московском автосалоне был представлен концепт Lada XRAY. На пресс-дне, 29 августа, у стенда АвтоВАЗа творилось форменное безумие и, надо понимать, рестайлинговая «Калина» в тот момент мало кого интересовала.

Некоторые граждане уже успели обрадоваться, что через пару лет прямо так же, как в видеоролике ниже, прокатятся по дорогам необъятной родины. И, может быть, даже раньше, чем на Ё-кроссовере, отложенном в долгий ящик.

Как говорит сам Стив Маттин, окруженный группой молодых дизайнеров, XRAY — это демонстрация будущего стиля автомобилей Lada, «взгляд внутрь», «рентгеновский снимок» тех процессов и перемен, которые происходят на АВТОВАЗе, и — новая дизайн-стратегия автомобилей LADA.

Пусть в народе и считается, что уход на АвтоВАЗ после работы в Mercedes и Volvo для Стива Маттина — чистый дауншифтинг, но отечественному предприятию это явно на пользу. Тем более, что европейские примеры подобных переходов показывают, что результат от них есть. Вот, к примеру, дизайнер Йозеф Кабан в молодости взял да и нарисовал Bugatti Veyron, потом долгое время трудился над модельным рядом Audi, а теперь управляет всеми процессами создания внешности новых автомобилей Skoda. И народные чешские машины от такого дауншифтинга бесспорно только хорошеют, в этом мы убедились на прошлогодней экскурсии в Skoda Design.

Наши прежние тольяттинские дизайнеры «Бугатти» в юности не рисовали. А некоторые даже и вживую рядом не стояли. Поэтому поначалу копировали «Фиаты» и робко проявляли фантазию. Получалось по-разному:

Теперь же с приходом Маттина автомобили Lada должны обрести «современный силуэт, оригинальные запоминающиеся пропорции и динамичный профиль». Вглядимся.

Смотря прямо «в лицо» концепту XRAY, граждане должны безошибочно читать символ латинской буквы «икс». По задумке Маттина, этот «икс» — основа визуализации образа новых автомобилей Lada. Воплощение выдуманного «икса» подчеркивают черный лакированный пластик и вставки из полированного алюминия, которые окаймляют перекрестие с внешних сторон.

Идея тут в том, что две половинки «икса» расширяют «лицо» автомобиля, демонстрируя его уверенность на дороге. О да, и безошибочно узнаваемая тольяттинская ладья в овале стала крупнее раза в два очевидно для этого же. Нечего стесняться, лыжню!

Дизайн кузова — просто песня! И не лубочная «Калинка-малинка» или горькие стенания бурлаков о черном вороне. Басом Федора Ивановича Шаляпина «Вдоль по Питерской» — и на «repeаt».

Напряженные линии и выштамповки «с подвыподвертом» даже удивляют и образуют тот же «икс». Резная кромка двери шокирует. Резкая рассекающая линия по низу борта запоминается. Все сочетание поверхностей должно напоминать атлета, напряженного перед стартом, или мощную мускулатуру скакуна. Уговорили, «только мы с конем»…

А диски-то, диски — чистый «солнцеворот»! Очень по-славянски. Но АвтоВАЗ про это — ни полслова. Зато про облик XRAY в целом — массу: прочность, надежность, динамичность и, конечно, эмоциональность и экспрессивность. Ассоциируете?

Едем дальше. Интерьер концепта Стив Маттин называет эргономически выверенным. И вот какое дело: все действительно просто и понятно. И, ловлю себя на мысли, хоть и ново, но знакомо! Вот такое дежавю и говорит о том, что ДНК бренда Маттину удалось расшифровать и клонировать.

В объемной форме панели приборов доминирует спидометр — он находится в центре, обособленный собственным подсвеченным полупрозрачным колодцем. Панель приборов целиком заключена в корпус из черного «глянцевого» пластика, сюда же интегрированы и водительские дефлекторы вентиляции.

В верхней части панели справа от водителя — зона управления второстепенными функциями автомобиля. Здесь центр композиции — крупный вращающийся контроллер мультимедийной системы. С его помощью водитель на дисплее, поднимающемся из передней панели, может просматривать текущее состояние автомобиля и менять настройки мультимедийной системы.

Концепт-кар LADA XRAY рассчитан на четырех человек, и каждому из них Стив Маттин выделил персональное пространство. Говорят, что на АвтоВАЗе уже разрабатывают продвинутый механизм складывания передних кресел, которые сдвигаются и одновременно позволяют откинуть спинку вперед, чтобы обеспечить удобный доступ на задние сиденья.

Эстетика салона XRAY — визуальное «наслоение» элементов, парящие вставки и рассеянная подсветка. Команда дизайнеров очень старалась создать тут атмосферу уверенности и защищенности. И бронзово-персиковые тона тоже играют на это: цветовое оформление настраивает на гармонию и спокойствие. Да и смотрятся цвета небедно.

Что из всего этого дойдет до серийного производства — пока не ясно. Можно догадаться о планах АвтоВАЗа о скором создании собственного кроссовера, ведь недаром концепт был создан в успешном сегменте SUV. К тому же и технические наработки имеются — изладить свой кроссовер в Тольятти пытаются последние 10–15 лет.

Архитектура передней панели и салона? Может быть.

Мощный рельеф мускулатуры скакуна? Вряд ли.

Пушистый велюр и персиковая отстрочка кресел? Да бросьте…

Геометрия передней части кузова? Однозначно. Для этого и делали. По словам руководства АвтоВАЗа, концепт XRAY, начиная с общей идеи и заканчивая мельчайшими деталями, демонстрирует планы выхода бренда Lada в новые рыночные сегменты. Вот такое реальное будущее.

Автогурманы плевались. Журналисты искали зазоры между кузовными панелями. Девушки восхищенно хлопали ресницами и в ладошки. XRAY похож и на то, и на другое, и на пятое — все вместе взятое. Но велосипед в наше время изобрести ой как непросто. К тому же задача перед Маттином стояла не показать разгул фантазии и торжества стекла с карбоном, а создать видение нового продукта. Lada XRAY не хочется лизнуть по завету Джобса, но и детей пугать им точно не придется.

ДНК бренда выделили. С почином.

Рассмотреть Lada XRAY снаружи и внутри, а также взглянуть на эскизы команды Стива Маттина можно в «Галерее» ниже:

Все факты о Lada Xray


Модель получила и двигатель объемом 1.8 литра, разработанный на АВТОВАЗе совместно с английской компанией Ricardo. Ориентировочные показатели мотора (122 л.с. и 173 Нм) подтвердились в марте 2015 года, когда

АВТОВАЗ полностью озвучил линейку силовых агрегатов Lada Xray, разве что уточнённая мощность составила 123 л.с. А в декабре 2015-го выяснилось, что 123-сильный мотор получат и другие модели Lada. Вариант Xray с таким мотором — это топ-версия. В сентябре 2015-го на АВТОВАЗе заявили, что подготовка силового агрегата, состоящего из мотора 1,8 литра и коробки АМТ, к серийному производству идёт строго по плану, собрано 6 экземпляров 123-сильных машин с АМТ. Производство 123-сильных моторов объёмом 1,8 литра должно было стартовать на АВТОВАЗе в декабре 2015 года, так, собственно, и произошло. На АВТОВАЗе заявляли, что все моторы анонсированной гаммы будут соответствовать Euro-6. Нельзя исключать и рождения впоследствии «заряженной» версии с турбированным двигателем, развивающим свыше 160 л.с.

Трансмиссия Lada Xray

Для топ-версии с мотором 1.8 Икс-Рею полагается автоматизированная механическая трансмиссия («робот»). АМТ — российская разработка, базой послужила стандартная вазовская «механика», а для работы над управляющей электроникой была привлечена германская фирма ZF. Сообщалось, что в варианте для кроссовера коробка АМТ получит спортрежим. А вот «чисто механических» российских коробок на Xray решили не ставить, предпочтя им, как и для Lada Vesta, французские — они лучше по виброакустическим свойствам и четкости переключения, поэтому с обоими 1.6-литровыми двигателями (и вазовским, и ниссановским) в паре идёт МКПП Renault. Французские моторы и коробки должны были начать производить на АВТОВАЗе в Тольятти с 15 марта 2015 года. Итак, силовые агрегаты Lada Xray:
  • двигатель 1.6 л, 106 л.с., бензин, атмосферный (ВАЗ) и МКПП (Renault),
  • двигатель 1.6 л, 114 л.с., бензин, атмосферный (Nissan) и МКПП (Renault),
  • двигатель 1.8 л, 123 л.с., бензин, атмосферный (ВАЗ, Ricardo) и АМТ (ВАЗ, ZF).
В марте 2015 года стало известно, что «мул»-агрегатоноситель (по сути — переоборудованный Sandero) с одним из силовых агрегатов направился на зимние калибровочные испытания в Германию. В апреле планировали собрать ещё один прототип, на котором будут отстраиваться летние калибровки силовых агрегатов. В августе вроде бы разрешился ещё один спорный вопрос: Олег Груненков заявил, что Веста и ИксРей получат версии с полным приводом. Однако полной ясности в этом вопросе в тот момент всё же не было. А в октябре поступила информация, что на тесты в Германию отправился ИксРей с топовым силовым агрегатом — 123-сильным мотором, сагрегатированным с АМТ. В декабре на такой машине покатался Аркадий Дворкович, и, что более важно, появились подробные технические характеристики Xray.

Комплектации Lada Xray

Изначально было заявлено, что производство начнётся со «средних» комплектаций, и что на Lada Xray будут доступны следующие опции: • сиденье водителя с регулировкой по высоте; • подогрев передних сидений; • мультимедийная система с 7-дюймовым тачскрином; • мультируль. Кроме того, известно, что кроссовер получит точно такой же топливный бак, как и седан Lada Vesta — объемом 55 литров. В июне 2015 года сайту Kolesa.ru стали известны подробности о комплектациях XRAY: 5 комплектаций, в «базу» войдут ABS и ESC и аудиосистема с 4 динамиками, а также будет простая версия «+ кондиционер», где система управления климатом предлагается как дополнение к «базе». Дорогие версии будут оснащены «мультирулём», который может получить кожаную отделку и подогрев. У некоторых версий могут появиться задние дисковые тормоза. В декабре 2015 года «Волжский автостроитель» сообщил, что базовая комплектация ИксРей будет богатой. В итоге у хэтча оказалось семь комплектаций.

Концепт кар лада x ray. Тенденции, объявления, фото

Содержание статьи:
  • Фото
  • Концепт высокого хэтчбека LADA XRAY. История создания » LADA Xray | Лада Х Рей — Официальный сайт Лада Клуба. Фото Лада Xray, видео лада х рей, новости X-ray, обзоры, цена LADA Xray, тест-драйв.
  • Видео
  • Похожие статьи
  • Lada XRAY — концепт — кар, созданный под руководством нового шеф-дизайнера Автоваза Стива Маттина, призван показать то, каким будет в скором будущем лицо отечественных автомобилей.  Как создавали Лада X — Ray.

    Новый внедорожник Lada X Ray Concept выглядит стильно, красиво, а самое главное оригинально.  НО увидим ли мы её в таком виде в каком она представлена, или Лада х рей так и останется концепт каром, как остался LADA проект С.

    Концепт — кар LADA XRAY — реальное будущее автомобилей LADA.  Сообщества › Автотюнинг › Блог › Lada X — Ray Concept официальное видео.  Внешне эта лада вызывает интнрес, да внутренее убранство порадовало но качество сборки.

    Наиболее известными концепт карами являются: Cadillac Cyclone, Chevrolet Volt, Ford Nucleon, Phantom Corsair, Pontiac Bonneville Special, Porsche 989, Volvo YCC, BMW GINA, Mercedes-Benz F700, Ford Iosis

    В то же время Икс Рей стал выше. Внешне эта лада вызывает интнрес, да внутренее убранство порадовало но качество сборки огорчило… то есть осталось на прежнем уровне Посмотрите на зазор-ступеньку между лобовым стеклом и панорамной крышей! Большая конкуренция и солидные бренды вызывали неверие в силу отечественных производителей. Вложенные деньги в наш автопром — уже должны были создать шедевры автопрома, а не могут ладу хрей выпустить.

    Серийная лада Xray | Отличия от лада XRay концепт — фото и видео | Цена

    После прихода к руководству АвтоВАЗ Бу Андерссона, предприятие значительно ускорило работы по внедрению в жизнь машин нового поколения. Перестройке подверглось всё: от оборудования Тольяттинского и Ижевского заводов до образа мышления простых рабочих. Тогда было решено будущее автомобилей под буквой Икс. Автомобиль должен иметь максимум комфорта, состоять из отечественных деталей и иметь приемлемую для В-класса цену.


    Главный нажим на качество! Концепт кар Лады XRay предстал в пятидверном варианте. Увеличив удобство в посадке пассажиров, он несколько потерял в изящных плавных обводах крыши, которая спускалась к задней части автомобиля.

    При этом багажник приобрёл окончательную форму. На большой машине они смотрелись несколько несуразно. В то же время Икс Рей стал выше. Особые изменения претерпел салон. По словам Бу Адерссона, бюджетная машина должна была выделиться богатым интерьером и множеством опций. Приборы разместились в трёх утопленных циферблатах. Мультимедийная система с большим дисплеем нашла себе место внутри консоли, освободив лобовое стекло. К комфорту добавились множественные карманы и ниши.

    В качестве силового агрегата для автомобиля был выбран двигатель от Альянса. В пару к нему шла пятиступенчатая механическая трансмиссия. Уже тогда был поднят вопрос о других моторах и КПП, в виде робота-автомата, полностью отечественной разработки. Этот концепт полностью определил конечный результат нового кроссовера Лада Х Рей. В серии машина получила три агрегата, два из которых были собраны исключительно по российским проектам.

    Сначала, это было воспринято как рекламный трюк. На АвтоВАЗ происходит коренное перерождение автомобилей Лада. Появлению первого концепта Lada XRay предшествовало множество факторов. Одним из них стало слияние с Альянсом Renault-Nissan.

    В то время мало кому верилось, что вазовские машины станут выглядеть совершенно по-новому. Изучая иностранные разработки, руководство АвтоВАЗ не переставало думать о совершенно новых, отечественных машинах. Параллельно с конструкторами, обучался и рабочий коллектив. Особые заслуги в появлении, сначала концептов, а затем и серийного кроссовера Лада Икс Рей, смело можно отнести на счёт Стива Маттина.

    Дизайнер раньше работал в серьёзных компаниях, среди которых можно отметить Мерседес и Вольво. Некоторые автомобили высшего класса Maybach, можно назвать визиткой знаменитого дизайнера из Великобритании.

    Именно тогда на российском автогиганте задумались о серьёзных переменах. Выбор пал на популярный В-класс. Особенным направлением стало создание собственного кроссовера. Значительный скепсис вызывал малый опыт российского автопрома в этом сегменте.

    Большая конкуренция и солидные бренды вызывали неверие в силу отечественных производителей. На августовском автосалоне в столице России был представлен кроссовер нового типа, который должен был вытеснить с производства Ладу Калину Кросс. С первого взгляда невозможно было понять, автомобиль какой марки представлен посетителям выставки.

    Lada X Ray Concept официальное видео

    Концепт высокого хэтчбека LADA XRAY. История создания » LADA Xray | Лада Х Рей

    Первый концепт-кар под названием LADA XRAY, который обозначил новое «лицо» будущих моделей LADA, АВТОВАЗ показал в 2012 году на Московском автосалоне. Спустя два года на ММАС-2014 был представлен еще один концепт с таким же названием. Но теперь это был автомобиль, который максимально приближен к будущему серийному авто. То есть если первый концепт LADA XRAY демонстрировал будущее развитие стиля автомобилей LADA, то второй концепт-кар стал первым воплощением этого стиля на готовящемся к выпуску серийном авто.

    По сути концепт LADA XRAY 2 – это проект BM-Hatch, а именно высокий переднеприводный хэтчбек, разрабатываемый АВТОВАЗом на основе автомобиля Renault Sandero, но с собственным дизайном.

    Показанный на ММАС-2014 концепт LADA XRAY изготовили в Италии в городе Турин в студии Vercarmodel. Там же был изготовлен и первый концепт Лада Икс Рей. Но в этот раз АВТОВАЗ заказал итальянской студии изготовление не одного концепт-кара, а целых пяти. В частности было изготовлено по два концепт-кара LADA XRAY и LADA Vesta, а также концепт гоночного автомобиля LADA Vesta WTCC. В Москве было показано три концепт-кара. Как рассказал главный дизайнер АВТОВАЗа Стив Маттин, копии Весты и LADA XRAY также были отправлены в Тольятти, чтобы сотрудники АВТОВАЗа также смогли увидеть будущее компании.

    Как и первый концепт, второй LADA XRAY является шоу-каром. Он построен построенные с помощью обходных, «выставочных» технологий. В автомобиле начинка максимально упрощена. Внешность же машины дизайнеры, наоборот, немного приукрасили. Стив Маттин отмечает: «Так могла бы выглядеть серийная топ-версия, будь у нас в бюджете чуть больше денег».

    У концепта кроссовера LADA XRAY реальные габариты, практически серийные интерьеры, полноценные кресла, двери, багажники. Длина XRAY достигает 4,2 метров. Расстояние между осями – 2,6 метров. Вместе с тем в концепт-каре нет ни одной серийной детали: под внешними панелями стальной каркас, пенопласт и электромоторы.

    Оригинальный дизайн XRAY разработал Евгений Ткачев. Он же два года назад работал и над концептуальной Ладой. Для финальной доводки дизайна LADA XRAY, чтобы вазовский дизайн «подружить» с жестким бюджетом французской платформы проект отдали более опытному специалисту – французу Жульену Друару, который ранее проработал 11 лет в парижском дизайн-центре Renault. В команде Маттина именно он отвечает за экстерьеры новинок.

    Вазовцы, получив исходную платформу, пытались сделать LADA XRAY дешевле и лучше, чем Sandero. Французы этому сопротивлялись. Но в итоге в автомобиле распознать в Икс Рее французский Логан сложно. Панель пола, подвеска, моторный щит, посадка и задний диван в LADA XRAY почти без изменений французские. Вместе с тем у Икс Рея шире колея. Задняя стойка крыши у Sandero – глухая, а у а XRAY — с дополнительными окошками, двери в Сандеро заходят на крышу, а в Икс Рее – нет, оконные рамки у французской модели не зачерненные, а в LADA XRAY от этой идеи отказались, ради сохранения легкости силуэта. Оригинальными у LADA XRAY будут приборы, руль, передняя панель. С серию пойдет проект интерьера LADA XRAY, который готовил Николай Суслов. Он же является создателем интерьера концепт-кара XRAY образца 2012 года.

    Под названием LADA XRAY на АВТОВАЗе планируют выпускать целое семейство автомобилей. «Просто» LADA XRAY – это переднеприводный хэтчбек, который в серию, как ожидается, пойдет в 2015 году. Следом за ним появится еще и XRAY Cross. Это будет полноприводный кроссовер на основе Дастера.

    Предполагается, что серийный XRAY получит французские моторы и механическую коробку передач. Также известно, что дизайнеры и инженеры для работы над семейством XRAY летают в Бухарест, где располагается Dacia. Французская платформа по мнению разработчиков, открывает новые возможности на рынке, сулит экономию и синергию ресурсов.

    Как и концепт LADA XRAY образца 2012 года, новый концепт создавался в ателье Vercarmodel по экспресс-технологии с использованием бутафорских кузовных элементов и деталей интерьера. На тележке с простым металлическим каркасом крепятся пенопластовые болванки. Затем на специальных станках от болванки отсекают все лишнее, ориентируясь на цифровую модель машины. Далее формируют внутреннюю полость автомобиля, куда в дальнейшем устанавливают сидения, приборную панель и прочие детали интерьера. В макет также устанавливают плексигласовые стекла, навешивают стеклопластиковые внешние панели.

    Под капот концепта устанавливают электромотор и механическую коробку передач. Электродвигатель работает от обычных свинцово-кислотных аккумуляторов, расположенных в моторном отсеке и подполье багажника. Кресла изготавливаются на основе каркасов донорских сидений: их заново обклеивают поролоном и обтягивают кожей. Передняя панель создается из модельной пены, которую наносят на фанеру. Сверху панель покрывают кожей или имитирующей пластик пленкой. С помощью таких технологий создавался как первый, так и второй концепт LADA XRAY.

    Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

    Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


    Настройка браузера на прием файлов cookie

    Существует множество причин, по которым файл cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее распространенные причины:

    • В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки браузера, чтобы принять файлы cookie, или спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
    • Ваш браузер спрашивает, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файл cookie.
    • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Попробуйте другой браузер, если вы подозреваете это.
    • Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы это исправить, установите правильное время и дату на своем компьютере.
    • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

    Почему этому сайту требуются файлы cookie?

    Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Предоставить доступ без файлов cookie потребует от сайта создания нового сеанса для каждой посещаемой вами страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


    Что сохраняется в файле cookie?

    Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в файле cookie; никакая другая информация не фиксируется.

    Как правило, в файле cookie может храниться только та информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, если вы не решите ввести его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступ к остальной части вашего компьютера, и только сайт, создавший файл cookie, может его прочитать.

    Высокоэффективная система FRET, способная к глубокой фотодинамической терапии, созданная на возбуждаемых рентгеновским излучением мезопористых наночастицах LaF3:Tb.

    Динамическая терапия (DT) путем генерации АФК in situ становится привлекательным терапевтическим методом с потенциалом для лечения глубоко расположенных опухолей, избегая побочных эффектов на здоровые ткани. Как один из видов DT, фотодинамическая терапия (PDT) была клинически одобрена для лечения рака, но ограничена поверхностными поражениями из-за плохой глубины проникновения возбуждающего света в ткани.Поэтому существует острая необходимость в поиске новых стратегий получения АФК при внешней стимуляции с высокой проникающей способностью или даже независимо от внешнего возбуждения. Наномедицина на основе неорганических наноматериалов или неорганическая наномедицина, которая может быть разработана с уникальными физико-химическими свойствами, может реагировать на внешние воздействия, такие как свет ближнего инфракрасного (БИК), ультразвук (УЗ), рентгеновское излучение и микроволновое излучение (МВ), или запускать внутренняя химико-биологическая реакция в области опухоли с образованием АФК для DT, демонстрирующая большие преимущества для лечения глубоко расположенных опухолей с высокой специфичностью, безопасностью и неинвазивностью.Тем не менее, большинство стратегий DT в значительной степени зависят от кислорода, в то время как микроокружение опухоли (TME), особенно микроокружение опухолевых клеток, характеризуется гипоксией и высокой концентрацией восстановительного глутатиона (GSH), что будет препятствовать образованию и накоплению ROS, таким образом, сильно ограничивая окислительное повреждение, вызванное АФК. Поэтому крайне важно повысить эффективность ДТ для усиления противоопухолевого эффекта. В этом обзоре мы кратко обобщаем последние достижения в разработке типов ДТ, связанных с генерацией АФК, включая БИК-индуцированную фото-/пироэлектродинамическую терапию, триггерную УЗ-соно-/пьезо-динамическую терапию, рентгеностимулированную радио-/ радиодинамическая терапия, микродинамическая терапия, запускаемая микроволнами, электродинамическая терапия, запускаемая переменным током, а также некоторые другие способы, не зависящие от внешнего возбуждения, такие как химиодинамическая терапия и самосветящаяся ФДТ.Что еще более важно, мы обобщаем различные стратегии модуляции микроокружения опухолевых клеток для повышения эффективности DT путем восстановления гипоксии, увеличения количества перекиси водорода (h3O2), регулирования pH и истощения GSH. Кроме того, мы также обсуждаем важность оценок нанотоксичности для безопасного проектирования наномедицины на основе неорганических наноматериалов, рассматриваем проблемы и ограничения DT, а также выдвигаем направление развития DT для будущего клинического применения. Мы надеемся, что этот своевременный и всесторонний обзор позволит увидеть ценность и будущие перспективы неорганической наномедицины, и необходимы более глубокие исследования для реализации преобразования стратегий DT, опосредованных неорганической наномедициной, в клиниках.

    Лабораторное дифрагированное рентгеновское мерцание для контроля пикометрических движений белковых молекул и применение к кристаллическим материалам: Структурная динамика: Том 8, № 4

    ВВЕДЕНИЕ внутри белковой молекулы имеет важное значение для понимания и контроля функции этой молекулы. На сегодняшний день методологически основное внимание уделяется технологии измерения отдельных молекул с использованием видимого света.Однако, даже если используется технология сверхвысокого разрешения, внутреннее движение белковых молекул пикометрического размера очень трудно обнаружить, поскольку такая технология использует длины волн в области видимого света. Необходимо приобрести технологию измерения, которую может использовать любой, с более высокой точностью позиционирования, чем технология измерения видимой одиночной молекулы на лабораторном уровне.

    Метод рентгеновского отслеживания отдельных молекул, называемый дифрагированным рентгеновским отслеживанием (DXT), 1–6 1.Ю. К. Сасаки, Ю. Судзуки, Ю. Яги, С. Адачи, М. Исибаши, Х. Суда, К. Тойота и М. Янагихара, “ Отслеживание отдельных нанокристаллов с помощью дифрагированных рентгеновских лучей», Phys. Ред. E 62 (3B), 3843–3847 (2000). https://doi.org/10.1103/PhysRevE.62.38432. Ю. К. Сасаки, Ю. Окумура, С. Адачи, Х. Суда, Ю. Танигучи и Н. Яги, “ Динамическое рентгеновское изображение одиночных молекул ДНК в пикометрическом масштабе», Phys. Преподобный Летт. 87 (24), 248102 (2001).https://doi.org/10.1103/PhysRevLett.87.2481023. С. Фуджимура, М. Мио, М. Курамочи, Х. Секигучи, К. Икезаки, М. Мио, К. Хенгфазатпорн, Ю. Шигета, Т. Кубо и Ю. К. Сасаки, « Скручивающие движения одного канала TRPV1, отклоняемые агонистами и антагонистами», J. Phys. Chem., B 124 (51), 11617–11624 (2020). https://doi.org/10.1021/acs.jpcb.0c082504. К. Мио, М. Исихара, С. Фуджимура, Д. Сасаки, С. Нодзава, К.Итиянаги, Р. Фукая, С. Адачи, М. Курамочи, Х. Секигучи, Т. Кубо и Ю. К. Сасаки, « Рентгеновский анализ движения отдельных рецепторов серотонина в живых клетках», Biochem. Биофиз. Рез. коммун. 529 (2), 306–313 (2020). https://doi.org/10.1016/j.bbrc.2020.05.2005. Ч. Р. Мортон, Н. Я. Жехожек, Джей Ди Маман, М. Курамочи, Х. Секигучи, Р. Рэмбо, Ю. К. Сасаки, О. Р. Дэвис и Л. Пеллегрини, “ Структурная основа для спирально-спиральной архитектуры CtIP человека», Open Biol.(в печати) (2021 г.). https://doi.org/10.1101/2021.03.05.4340606. Р. П. Рэмбо и К. Иноуэ, “ Биофизические характеристики в растворенном состоянии», в Encyclopedia of Virology , 4-е изд., под редакцией D. Bamford и M.A. Zuckerman (2021), Vol. 1 , стр. 191–198. использует явление дифракции, связанное с нанокристаллами золота, помеченными на белковых молекулах для наблюдения, что позволяет чрезвычайно точно измерять внутреннюю молекулярную динамику. Однако DXT требует использования белого рентгеновского излучения от большой установки синхротронного излучения для отслеживания дифрагированных рентгеновских пятен от идеальных нанокристаллов золота.Недавно было предложено дифрагированное рентгеновское мерцание (DXB) с использованием монохроматического рентгеновского излучения, которое может измерять внутримолекулярное движение белков как коэффициент диффузии, 7 7. H. Sekiguchi, М. Курамочи, К. Икезаки, Ю. Окамура, К. Йошимура, К. Мацубара, Дж. В. Чанг, Н. Охта, Т. Кубо, К. Мио, Ю. Судзуки, Л. М. Г. Чавас и Ю. К. Сасаки, « Дифрагированное мерцание рентгеновских лучей отслеживает движения отдельных белков», Sci. Респ. 8 (1), 17090 (2018). https://doi.org/10.1038/s41598-018-35468-3, и в настоящее время его использование расширяется. 4,8,9 4. К. Мио, М. Исихара, С. Фуджимура, Д. Сасаки, С. Нодзава, К. Итиянаги, Р. Фукая, С. Адачи, М. Курамочи, Х. Секигучи, Т. Кубо и Ю. К. Сасаки, « Рентгеновский анализ движения отдельных рецепторов серотонина в живых клетках», Biochem. Биофиз. Рез. коммун. 529 (2), 306–313 (2020).https://doi.org/10.1016/j.bbrc.2020.05.2008. М. Курамочи, Х. Омата, М. Исихара, С. Ханслин, М. Мизумаки, Н. Кавамура, Х. Осава, М. Судзуки, К. Мио, С. Секигучи и Ю. К. Сасаки, « Наклонно-вращательные движения кристалла галогенида серебра с мерцанием дифрагированного рентгеновского излучения. Респ. 11 (1), 4097 (2021). https://doi.org/10.1038/s41598-021-83320-y9. Дж. Чанг, Ю. Бэк, И. Ли, Х. Секигучи, К. Итиянаги, К.Мио, С. Нодзава, Р. Фукая, С. Адачи, М. Курамочи и Ю. К. Сасаки, « Дифрагированные рентгеновские измерения мерцания рецепторов интерлейкина 15 во внутренней/внешней мембране живых NK-клеток, Biochem. Биофиз. Рез. коммун. 556 , 53–58 (2021). https://doi.org/10.1016/j.bbrc.2021.03.144 Кроме того, в методе, используемом для производства нанокристаллов золота очень хорошего качества, что необходимо для DXT и DXB, используется особая техника с использованием эпитаксиального роста на монокристалл в сверхвысоком вакууме.Таким образом, исследователям практически сложно использовать высокочувствительные измерения высокоскоростной динамики с использованием DXT и DXB. На рис. 1 и в таблице I сравниваются DXT и DXB с синхротронным и лабораторным рентгеновскими источниками. Рисунки 1(a) и 1(b) просто объясняют принцип метода DXT с использованием белого рентгеновского излучения от источника синхротронного излучения (СИ) и DXB с использованием монохроматического рентгеновского излучения соответственно. DXT обнаруживает движение молекул-мишеней, меченных нанокристаллом, путем отслеживания траектории пятна дифракции Лауэ от метки [рис.1(а)]. Когда используются монохроматические рентгеновские лучи, движения дифракционных пятен ведут себя как включение / выключение мерцания на кольце Дебая-Шеррера. DXB отслеживает такие мерцания (флуктуации интенсивности), которые содержат информацию о молекулярном движении [рис. 1(б)]. Обратите внимание, что для DXT всегда требуется источник SR, в то время как DXB теоретически может быть выполнен в лаборатории. Поскольку измерение DXT/DXB нацелено на некристаллическую систему, такую ​​как отдельные белковые молекулы, оно требует мечения нанокристаллов золота. На рисунках 1(c) и 1(d) показана концепция измерения метода DXT/DXB применительно к кристаллическим образцам.Если сам образец является кристаллическим, нет необходимости маркировать нанокристаллы золота. Распознав измеренное кольцо дифракции рентгеновских лучей как перекрывающиеся движущиеся дифракционные пятна, можно оценить движение мелких монокристаллических частиц в поликристаллическом теле. На рис. 1(c) показано измерение DXB в случае монокристалла, а на рис. 1(d) показано измерение динамики образца в поликристаллическом состоянии. Измерение DXB с использованием монокристалла измеряет каждое дифракционное пятно и считается измерением фактора Дебая – Валлера (фактор B) с временным разрешением. 10 10. Дж. Понтиус, Дж. Ришель и С. Дж. Водак, “ Отклонения от стандартных атомных объемов как мера качества кристаллических структур белка», J. Mol. биол. 264 (1), 121–136 (1996). https://doi.org/10.1006/jmbi.1996.0628 Внутренние движения белков или материалов, обнаруженные с помощью DXT/DXB, можно разделить на два типа, как показано на рис. 1(д) и 1(е). Одним из них является вращательное диффузионное движение монокристаллической частицы (рис. 1(e)], таких как движение меченых нанокристаллов золота в DXT, показанное на рис.1(а). Другой тип — флуктуационное движение кристаллической решетки в монокристаллической области (рис. 1(е)]. Что касается этого движения кристаллической решетки, то, помимо вращательного движения, поступательное движение кристаллической решетки также изменяет положение пятен рентгеновской дифракции. Таким образом, DXT/DXB может обнаруживать эти суммарные движения. Два движения, показанные на рис. 1(e) и 1(f) применяются к схемам DXT/DXB с рис. 1(а)–1(г). Поскольку в схемах А и В используется метод маркировки, обнаруживается только вращательное диффузионное движение.В расположении на рис. 1(c) обнаружены только флуктуации кристаллической решетки, тогда как в расположении на рис. 1(d) обнаружены как вращательное диффузионное движение, так и флуктуации кристаллической решетки.

    ТАБЛИЦА I. Сравнение DXT и DXB в лаборатории и на синхротроне.

    A
  • 0
  • 2 μ S (SR) -ми ( лаборатория)
  • DXB (B) DXB (C) DXB (D)
    Цель Single Crystal монокристаллический монокристаллический поликристаллин
    Да Да NO NO
    SR Lab / SR Lab / SR Лаборатория / SR
    рентгеновский и энергетический резолюция белый ΔE / E ≈ 10 -4
  • 3
  • монохроматический ΔE / E ≈ 10 -4 -10 -2 -10 -2 монохроматический ΔE / E ≈ 10 -4 -10 -2 -2 -2
  • 3
  • монохроматический Δe / e ≈ 10 -4 -10 -2 -2
    Концепция анализа Отслеживание дифракционных пятен из этикетки Отслеживание колебания дифракционной интенсивности от этикетки Отслеживание флуктуации дифракционной интенсивности от цели Отслеживание колебания дифракционной интенсивности от цели
    Разрешение времени 9002 μ S мк с (SR)-мс (лаборатория) мк с (SR)-мс (лаборатория)

    источники лучей.Первым примером нашей лаборатории-DXB является бычий сывороточный альбумин (BSA), меченный коммерчески доступными коллоидами золота. Это измерение показывает, что DXB с использованием коммерчески доступного коллоидного золота с лабораторным источником рентгеновского излучения можно контролировать движение белка. Вторым примером измерения DXB является монокристалл антифризного белка (AFP). Последним примером измерения DXB является полимер, и его динамическая информация может быть получена. Однако лабораторные источники рентгеновского излучения не могут обеспечить достаточный поток, поэтому данные рентгеновского дифракционного изображения с временным разрешением должны быть тщательно обработаны статистически для извлечения полезной динамической информации.

    МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

    Раздел:

    ВыбратьВерх страницыРЕФЕРАТВВЕДЕНИЕМАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ <<РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕЗАКЛЮЧЕНИЕ

    Подготовка образца

    Коллоидный раствор золота размером 80 нм был приобретен у BBI Solutions (Кардифф, Великобритания). Кристаллизованный порошок БСА был приобретен у FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation (Осака, Япония).

    АФП бельдюги с надрезом (nfeAFP) экспрессировали, очищали и кристаллизовали, как описано ранее. 11 11.С. Махатабуддин, Д. Фуками, Т. Араи, Ю. Нишимия, Р. Симидзу, К. Шибазаки, Х. Кондо, М. Адачи и С. Цуда, “ Полипентагональные льдоподобные водные сети возникают исключительно в варианте с улучшенной активностью связывающего лед белка», Proc. Натл. акад. науч. США 115 (21), 5456–5461 (2018). https://doi.org/10.1073/pnas.1800635115 Вкратце, nfeAFP экспрессировали в E. coli и очищали с помощью катионообменной хроматографии. Очищенный nfeAFP кристаллизовали методом паровой диффузии висячих капель.Затем 2–4  мкл л 100 мг/мл раствора nfeAFP смешивали с 1  мкл л кристаллизационного раствора [2,5 М сульфат аммония  + 0,1 М цитратно-натриевый буфер (pH 5,0)] и наносили на полиимидную пленку в 24-луночный кристаллизационный планшет. Через 3–5 дней наблюдали несколько кристаллов белка размером 0,5 мм, которые использовали для измерения DXB.

    Поли{2-(перфтороктил)этилакрилат} (PC 8 FA) получали свободнорадикальной полимеризацией перфтороктилэтилакрилата (C 8 FA, Tokyo Chemical Industry Co., Ltd, Токио, Япония). Точнее, в стеклянную пробирку для реакции вводили C 8 FA (10,1 г, 20 ммоль), а затем 0,04 г (0,2 ммоль) 2,2′-азобис(изобутиронитрила) (AIBN, FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation) в качестве инициатора и реагировали при 65 °C при перемешивании в условиях N 2 . Реакцию останавливали через 18 ч после добавления ДАК. Прореагировавший раствор выливали в метанол и удаляли супернатант с получением оставшегося белого твердого вещества. Полученное белое твердое вещество сушат в вакууме при комнатной температуре в течение 24 ч и затем охарактеризовывают с помощью протонного ядерного магнитного резонанса ( 1 Н-ЯМР) и гельпроникающей хроматографии (ГПХ).После растворения белого твердого вещества в смешанном растворителе, состоящем из дейтерированного хлороформа (FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation) и гексафторбензола (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd), для белого твердого вещества измеряли H-ЯМР с использованием JNM-ECZ400S. (JEOL Ltd, Токио, Япония). Три спектра для слабого магнитного поля, полученные от протонов акрилоильной группы мономера C 8 FA, исчезли, а спектры, полученные от протонов этильной группы между фторалкильной и сложноэфирной группами, стали шире, что свидетельствует о протекании полимеризации. и PC 8 FA в виде белого порошка.Среднечисловую молекулярную массу ( M n ), среднемассовую молекулярную массу ( M w ) и молекулярную дисперсию (MWD) PC 8 FA определяли с помощью ГПХ, измеренной в DJK Corporation (Канагава). , Япония). Полученные M n , M w и ММР составили 31 000   г/моль, 570 000   г/моль и 19 соответственно.

    Дифрагированное рентгеновское мерцание

    Измерения DXB проводились с использованием лабораторного источника рентгеновского излучения (MicroMax-007 HF: медный анод, длина волны (λ) = 1.54 Å, 40 кВ, 30 мА), а дифракционные изображения с временным разрешением регистрировали с использованием детектора 2D-счета фотонов (Pilatus 200K-A, Dectris, Швейцария), как показано на рис. S1(а) и S1(б). Расстояния от образца до детектора составляли 30 мм, 60 мм и 71 мм для BSA, nfeAFP и PC 8 FA соответственно. Время экспозиции на кадр и время интервала составляли 42,0 мс и 50,0 мс соответственно.

    Однопиксельная автокорреляционная функция для анализа DXB

    Интенсивность дифракции в каждом пикселе без учета межмодульной прямоугольной области детектора была извлечена ImageJ (https://imagej.nih.gov/ij/). Когда флуктуации интенсивности с временным разрешением показывали долгосрочную тенденцию, такие тенденции удалялись с помощью подобранной линейной функции. Траектория интенсивности с временным разрешением для каждого пикселя была рассчитана с использованием следующей АКФ: 4,7,8 4. К. Мио, М. Исихара, С. Фуджимура, Д. Сасаки, С. Нодзава, К. Итиянаги, Р. Фукая, С. Адачи, М. Курамочи, Х. Секигучи, Т. Кубо и Ю. К. Сасаки, « Рентгеновский анализ движения отдельных рецепторов серотонина в живых клетках», Biochem.Биофиз. Рез. коммун. 529 (2), 306–313 (2020). https://doi.org/10.1016/j.bbrc.2020.05.2007. Х. Секигучи, М. Курамочи, К. Икезаки, Ю. Окамура, К. Йошимура, К. Мацубара, Дж. В. Чанг, Н. Охта, Т. Кубо, К. Мио, Ю. Судзуки, Л. М. Г. Чавас и Ю. К. Сасаки, « Дифрагированное мерцание рентгеновских лучей отслеживает движения отдельных белков», Sci. Респ. 8 (1), 17090 (2018). https://doi.org/10.1038/s41598-018-35468-38. М.Курамочи, Х. Омата, М. Исихара, С. Ханслин, М. Мизумаки, Н. Кавамура, Х. Осава, М. Судзуки, К. Мио, С. Секигучи и Ю. К. Сасаки, “ Наклонно-вращательные движения кристалла галогенида серебра с мерцанием дифрагированного рентгеновского излучения. Респ. 11 (1), 4097 (2021). https://doi.org/10.1038/s41598-021-83320-y, где I(t) представляет интенсивность дифракции. В скобках ⟨⟩ указаны усредненные по времени значения. Рассчитанная АКФ подгонялась к одной экспоненциальной кривой по формуле АКФ(t) = A · exp(−Гt) + y, где A — амплитуда, y — значение преобразования, Г — постоянная затухания, t — временной интервал .Параметры A и y определялись из рассчитанной АКФ. Константа затухания Г оптимизировалась для соответствия кривой АКФ с использованием нелинейного метода наименьших квадратов. Константы затухания были выбраны так, чтобы удовлетворять следующим условиям: (I) 0 Рис. 2(а)]. Коэффициент вращательной диффузии (D R ) был рассчитан с использованием следующего уравнения, как описано ранее: 8 8. M. Kuramochi, Х. Омата, М. Исихара, С. Ханслин, М. Мизумаки, Н. Кавамура, Х. Осава, М.Судзуки, К. Мио, С. Секигучи и Ю. К. Сасаки, « Наклонно-вращательные движения кристалла галогенида серебра с мерцанием дифрагированного рентгеновского излучения. Респ. 11 (1), 4097 (2021). https://doi.org/10.1038/s41598-021-83320-y
     DR=Γ · Φθ24,  (2)
    где Γ – медианное значение константы распада АКФ1 это вращательное смещение. Биннинг

    пикселей Биннинг

    пикселей улучшает отношение сигнал-шум (SNR) за счет пространственного разрешения.Интенсивности дифракции от нанокристаллов при времени экспозиции 50 мс на лабораторном источнике рентгеновского излучения были низкими. Обработка изображений увеличивает интенсивность сигнала и, вероятно, эффективна для нашего анализа АКФ. Чтобы выбрать достаточно малый размер бина без ущерба для качества АКФ, мы тщательно исследовали дифракционные пятна на кольце Дебая-Шеррера. В лабораторных измерениях наблюдалось несколько дифракционных пятен круглой формы из-за кристаллического образца и интенсивности падающего луча.Размер наблюдаемых дифракционных пятен для нанокристаллов золота составлял примерно 3 × 3 пикселя [рис. 2(б)]. Мы выполнили биннинг 2 × 2 и 3 × 3 пикселей для всех XRD-изображений. Интенсивность дифракции увеличивается пропорционально количеству пикселей в бинах [Рис. 2(с)]. Флуктуации интенсивности отдельных пикселей после бинирования, вероятно, отражают движение отдельных пятен. Биннинг пикселей для DXB оптимизирует размер пикселя для дифракционных пятен и может использоваться для точной оценки вращательного движения отдельных молекул.Кроме того, есть также преимущество для проведения высокоскоростных измерений в лабораторных экспериментах, таких как разрешение 50  мс, т. е. достижение улучшенного SNR.

    Инверсия времени АКФ

    Постоянная затухания АКФ в этой статье отражает среднее время исчезновения дифракционных пятен от кольца Дебая–Шеррера. На самом деле АКФ примерно в половине всех пикселей затухали экспоненциально. С другой стороны, АКФ в другой половине постепенно увеличивались с запаздыванием (рис. 2(г)].Увеличение интенсивности дифракции связано с процессом вхождения дифракционных пятен в кольцо Дебая–Шеррера, что приводит к увеличению АКФ. Автокорреляционная функция математически является четной функцией 12,13 12. J. Semmlow, “ Основные понятия в обработке сигналов», в «Сигналы и системы для биоинженеров» ( Elsevier, 2012), стр. 35–80.13. В. К. Гарг и Ю. К. Ван, « Цифровая связь и сети связи», в Справочник по электротехнике ( Elsevier Academic Press, 2005).[Рисунок. 2(е)]. Таким образом, процесс выхода можно анализировать, используя константу затухания АКФ после обработки с обращением времени [рис. 2(е)]. Для оценки процесса выхода дифракционных пятен как константы затухания АКФ были рассчитаны АКФ после обработки обращения времени в каждом пикселе. Постоянная затухания АКФ после обработки обращения времени представляет собой мультипликативную обратную величину среднего времени, за которое дифракционные пятна входят в кольцо Дебая – Шеррера.

    РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

    Раздел:

    ВыбратьВерх страницыРЕЗЮМЕВВЕДЕНИЕМАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ <<ЗАКЛЮЧЕНИЕ Причина выбора трех систем образцов для лабораторных измерений DXB заключается в измерении двух различных моделей движения [рис.1(д) и 1(е)]. Измерение БСА методом маркировки соответствует рис. 1(б), и его движение можно идентифицировать как вращательно-диффузионное движение. Следующий пример, монокристалл белка, соответствует рис. 1(в), и можно обнаружить только флуктуационное движение кристаллической решетки. Последний пример представляет собой поликристаллический полимер и соответствует рис. 1(d). Обнаруженное внутреннее движение приписывается как вращательному диффузионному движению монокристаллического домена, так и динамике изменения между кристаллическими решетками внутри монокристаллического домена.BSA был выбран для первого образца DXB с лабораторным источником рентгеновского излучения, потому что этот глобулярный белок массой 66 кДа широко используется в самых разных экспериментах в качестве контроля. Молекулы БСА были помечены нанокристаллами золота через группу -SH остатка цистеина на его поверхности (рис. 3(a)], который, возможно, представляет собой Cys34, поскольку только этот остаток находится в восстановленном состоянии для мономера BSA. 14 14. Майорек К.А., П. Дж. Поребски, А. Дайал, М. Д. Циммерман, К. Яблонска, А.Дж. Стюарт, М. Хрущ и У. Минор, “ Структурная и иммунологическая характеристика альбуминов сыворотки крупного рогатого скота, лошади и кролика», Мол. Иммунол. 52 (3–4), 174–182 (2021). https://doi.org/10.1016/j.molimm.2012.05.011 Затем меченный коллоидным золотом БСА, как показано на рис. 3(b), прикрепляли к золотой подложке через N-сукцинимидил 3-(2- пиридилдитио)пропионат (SPDP, Dojindo Laboratories, Кумамото, Япония), который является сшивающим агентом между аминной (лизиновые остатки БСА) и сульфгидрильной группами (золотой субстрат).Поскольку сайт связывания золотого субстрата с остатками Lys для БСА является случайным, предполагалось, что динамика белка для БСА в этом эксперименте включает множественные движения. Образец подвергали рентгеновскому облучению при 20 °C (рис. S1(c)] (Ref. 2828. См. дополнительный материал на https://www.scitation.org/doi/suppl/10.1063/4.0000112 для экспериментальной установки для лаборатории DXB (рис. S1), пример данных времени анализ обращения АКФ (рис. S2) и подробные параметры констант затухания АКФ (таблицы S1–S3).), а дифракционные изображения с временным разрешением регистрировались со скоростью 50 мс/кадр в течение 100 с (2000 кадров). Рентгеновская дифракция от плоскости (111) меченого коллоидного золота [рис. 3(c)] анализировали с использованием анализа ACF. Поскольку имеющиеся в продаже коллоиды золота имеют значительно низкую степень кристалличности, мы с удивлением обнаружили, что четкие дифракционные изображения были получены от коллоидов золота диаметром 80 нм с помощью лабораторных рентгеновских трубок. На рисунках 3(d) и 3(e) показаны пиксели, проанализированные с помощью прямого (красный) и обратного (синий) анализа АКФ соответственно, как описано на рис.2(г) и 2(д). Аналогичные результаты были получены независимо от направления анализа ACF во времени (рис. S2) (Ref. 2828. См. дополнительный материал на https://www.scitation.org/doi/suppl/10.1063/4.0000112 для экспериментальной установки для лаборатории DXB. (рис. S1), пример данных анализа АКФ с обращением времени (рис. S2) и подробные параметры для констант затухания АКФ (таблицы S1–S3).). Каждый пиксель был проанализирован либо с помощью прямого по времени, либо с обратным анализом ACF и не перекрывался. На рис.3(f) слева и справа соответственно. Адсорбированный БСА на золотой подложке испытывает в водном растворе общее броуновское движение, величина которого оценивается по движению коллоидного золота. Однако размер движения нельзя указать заранее, поэтому необходимо оценить, какой размер пикселя следует соблюдать. Если оптимальный размер движения коллоидного золота соответствует размеру единичного пикселя, полученного путем биннинга (1 × 1, 2 × 2 или 3 × 3), полученная константа затухания АКФ будет максимальной.Константа затухания АКФ для BSA увеличивалась с увеличением размера биннинга, а максимальное значение константы затухания было получено при применении биннинга 3 × 3 [рис. 3(f) и таблица S1]. Таким образом, было обнаружено, что движение адсорбированного БСА соответствует размеру пикселя, оцененному с помощью биннинга 3 × 3. Поскольку количество точек статистических данных резко уменьшалось при использовании размера биннинга 4 × 4 или более, мы использовали максимальный размер бининга 3 × 3. Коэффициент вращательной диффузии (D R ) оценивался по затуханию АКФ. постоянное значение, полученное для биннинга 3 × 3 и имеющее значение 0.73 pm 2 /с (табл. II). Эти результаты предполагают, что движение белка миллисекундного порядка может быть измерено с помощью DXB с лабораторным источником рентгеновского излучения.

    ТАБЛИЦА II. Резюме результатов, полученных в результате анализа ACF.

  • 0
  • MALK Binning 2θ (°) 2θ (°) D -Space (Å) Φ θ (PM) γ (S -1 ) D R (PM 2 / S)
    BSA RD A RD A Золотая коллоидная этикетка 3 × 3 38 .24 2.32 2.32 3.18 0,29 ± 0,01 0,29 ± 0,01 0,73 ± 0,01
    AFP DF B 1 × 1 12.59 7.02 2.55 0,40103 0,40 ± 0,08 0,65 ± 0.14
    PC 8 FA RD & DF RD Mill (Poly) 2 × 2 18.51 4,79 6.51 0.31 ± 0,01 3,29 ± 0,05
    Затем DXB применяли к другой биомолекуле, антифризному белку (АФП). АФП представляет собой криозащитную молекулу, которая способна связываться с кристаллами льда, подавляя их рост. 15 15. К. А. Найт, CC Cheng и А. Л. Де Врис, « Адсорбция альфа-спиральных антифризных пептидов на специфических плоскостях поверхности кристаллов льда», Biophys. J. 59 (2), 409–418 (1991). https://doi.org/10.1016/S0006-3495(91)82234-2 Мы использовали монокристалл AFP для измерения немеченого DXB.Поскольку АФП действует при отрицательных температурах, мы сравнили молекулярное движение АФП при разных температурах, что позволит получить информацию о молекулярном механизме АФП. ОВП зубчатоперой бельдюги 16 16. Ю. Нишимия, Р. Сато, М. Такамичи, А. Миура и С. Цуда, “ Кооперативный эффект изоформ антифризного белка типа III, выраженный у бельдюги с зубчатым плавником, Zoarces elongatus Kner», FEBS J. 272 (2), 482–492 (2005). https://дои.org/10.1111/j.1742-4658.2004.04490.x был выбран для этого эксперимента [Рис. 4(a)], так как этот AFP может легко кристаллизоваться, и его размер относительно велик [Рис. 4(б)]. 11 11. Махатабуддин С., Д. Фуками, Т. Араи, Ю. Нишимия, Р. Симидзу, К. Шибазаки, Х. Кондо, М. Адачи и С. Цуда, “ Полипентагональные льдоподобные водные сети возникают исключительно в варианте с улучшенной активностью связывающего лед белка», Proc. Натл. акад. науч. США 115 (21), 5456–5461 (2018).https://doi.org/10.1073/pnas.1800635115 Рентгеновский кристалл и ЯМР 17 17. Х. Кумета, К. Огура, Ю. Нишимия, А. Миура, Ф. Инагаки и С. Цуда, “ Примечание по структуре ЯМР: Дефектная изоформа и ее вариант с улучшенной активностью антифризного белка типа III из Zoarces удлиняет Кнера», J. Biomol. ЯМР 55 (2), 225–230 (2013). https://doi.org/10.1007/s10858-012-9703-9 Структура nfeAFP хорошо изучена, в то время как о молекулярном движении этого белка в кристаллизованном состоянии ранее не сообщалось.nfeAFP кристаллизовали на полиимидной пленке в лунке 24-луночного кристаллизационного планшета. Образец для DXB готовили путем удаления кристаллизационного раствора вокруг кристаллов AFP и герметизации другой полиимидной пленкой во избежание высыхания. Подготовленные кристаллы, прослоенные двумя полиимидными пленками, устанавливались на держатель образцов. Монокристалл nfeAFP в держателе образца облучали лабораторными рентгеновскими лучами, и его дифракцию с временным разрешением собирали со скоростью 50  мс/кадр. Температуру образца контролировали с помощью терморегулирующего столика Linkam 10084L (Linkam Scientific Instruments, Великобритания) и проводили серию измерений с использованием одного и того же белкового кристалла без изменения положения.На рис. 4(c) показана дифракция рентгеновских лучей для кристалла nfeAFP. Константа затухания АКФ рассчитывалась по флуктуациям интенсивности каждого пикселя [рис. 4(г) и 4(д)]. При этом флуктуации интенсивности дифракционных пятен указывают на незначительное изменение d -пространства, которое, возможно, связано с колебаниями атомов в кристалле белка.

    В экспериментах по дифракции рентгеновских лучей монокристаллов белка с использованием источника синхротронного излучения (СИ) повреждения от рентгеновского излучения можно избежать, измеряя его при температуре жидкого азота.Однако поток фотонов лабораторного источника рентгеновского излучения составляет всего 10 8 фотонов/с, так что становится возможным измерение DXB монокристаллов белка при комнатной температуре. Фактически не было изменений в интенсивности рентгеновской дифракции кристалла образца до и после измерения DXB, в то время как общее время облучения нашего измерения DXB при трех разностях температур составляло примерно 300  с.

    На рис. 4(f) показано сравнение констант затухания АКФ при разных температурах.Поскольку количество пикселей было недостаточным для подгонки под гистограмму, мы сравнивали константы затухания АКФ с ящичковыми диаграммами, а не с гистограммами. Интересно, что постоянная распада кристалла AFP увеличивалась с понижением температуры, что не согласуется с броуновским движением. Этот результат наблюдался воспроизводимо. Аналогичная тенденция была отмечена для другого антифризного белка, полученного из длиннорылого браконьера ( Brachyopsis segaliensis ). 18 18. Р. Окада, Т. Араи, С.Цуда и Ю. К. Сасаки, « Рентгеновский анализ отдельных молекул функций антифриза по динамике белка», Cryobiol. криотехнология. 63 (2), 85–88 (2017). https://doi.org/10.20585/cryobolcryotechnol.63.2_85 В этом отчете молекулярная подвижность АФП определялась с помощью одного измерения молекулярного движения, DXT, и наблюдалось ее увеличение с понижением температуры. Кроме того, было продемонстрировано, что растворимость в воде многих известных видов АФП, включая нфеАФП, резко увеличивается при понижении температуры. 19 19. С. Цуда, А. Ямаути, Н. М. М. У. Хан, Т. Араи, С. Махатабуддин, А. Миура и Х. Кондо, “ Белки-антифризы рыбного происхождения и гликопротеины-антифризы проявляют разные свойства связывания льда с увеличением концентрации», Biomolecules 10 (3), 423 (2020). https://doi.org/10.3390/biom10030423 Следовательно, усиление молекулярного вибрационного движения AFP при низкой температуре может быть общей чертой различных AFP и иметь важное значение для связывания со льдом.Две тысячи кадров 50-мс рентгеновских дифракционных изображений были разделены на два, четыре и десять наборов данных по 1000, 500 и 200 кадров соответственно, и эти три набора данных снова были проанализированы с помощью АКФ [рис. 4(е)]. По мере уменьшения количества кадров различия в константах затухания между температурами становились неоднозначными. Уменьшение количества кадров означает сокращение общего времени наблюдения. Поэтому для обнаружения характерного движения в кристаллах AFP требуется длительное наблюдение. Наконец, DXB применяли для измерения молекулярной динамики на полимере с водо/маслоотталкивающими свойствами, PC 8 FA.Этот полимер имеет фторалкильные группы на боковых цепях и образует гексагональную упаковку. 20–22 20. К. Жан-Марк, С. Жиро и Д. Джууэ, « Структура и свойства поверхности жидкокристаллических фторалкилполиакрилатов: роль спейсера», Langmuir 17 (23), 7237–7244 (2001). https://doi.org/10.1021/la010238g21. К. Хонда, М. Морита, Х. Оцука и А. Такахара, “ Структура молекулярной агрегации и поверхностные свойства тонких пленок поли(фторалкилакрилата), Macromolecules 38 (13), 5699–5705 (2005).https://doi.org/10.1021/ma050394k22. М. Мацунага, Т. Судзуки, К. Ямамото и Т. Хасэгава, « Анализ молекулярной структуры в тонкой пленке поли(2-перфтороктилэтилакрилата) с нанесенным погружением методом инфракрасной спектрометрии с многоугольным разрешением», Macromolecules 41 (15), 5780–5784 (2008). https://doi.org/10.1021/ma800850k Подробное динамическое наблюдение молекулярного состояния фторалкильных групп в боковой цепи PC 8 FA в очень коротком временном масштабе никогда ранее не проводилось напрямую, хотя ранее предполагалось, что его водоотталкивающая способность связана с кристаллической упаковкой (жесткостью) фторалкильных групп. 21 21. К. Хонда, М. Морита, Х. Оцука и А. Такахара, “ Структура молекулярной агрегации и поверхностные свойства тонких пленок поли(фторалкилакрилата), Macromolecules 38 (13), 5699–5705 (2005). https://doi.org/10.1021/ma050394k Однако механизм многих физических свойств полимеров часто до сих пор неизвестен. Поскольку движение полимерной цепи влияет на ее характеристики, предполагается, что если немеченый DXB, который легко измерить с помощью лабораторного рентгеновского оборудования, может наблюдать движение полимерной цепи, это очень полезно и ценно как для академически и промышленно.Поэтому мы измерили молекулярную динамику PC 8 FA в качестве модели для измерения динамики полимера с использованием немеченого DXB. Образец, используемый для измерения DXB, был подготовлен путем помещения PC 8 FA на полиимидный лист, нагревания его до 130 °C для расплавления, а затем совмещения с другим полиимидным листом. На рис. 5(а) показано, что рентгенограмма PC 8 FA наблюдалась при 2 θ = ок. 18,5 °, а его d -пространство оценивается как 4.8 Å. 20–24 20. К. Жан-Марк, С. Жиро и Д. Джууэ, « Структура и свойства поверхности жидкокристаллических фторалкилполиакрилатов: роль спейсера», Langmuir 17 (23), 7237–7244 (2001). https://doi.org/10.1021/la010238g21. К. Хонда, М. Морита, Х. Оцука и А. Такахара, “ Структура молекулярной агрегации и поверхностные свойства тонких пленок поли(фторалкилакрилата), Macromolecules 38 (13), 5699–5705 (2005).https://doi.org/10.1021/ma050394k22. М. Мацунага, Т. Судзуки, К. Ямамото и Т. Хасэгава, « Анализ молекулярной структуры в тонкой пленке поли(2-перфтороктилэтилакрилата) с нанесенным погружением методом инфракрасной спектрометрии с многоугольным разрешением», Macromolecules 41 (15), 5780–5784 (2008). https://doi.org/10.1021/ma800850k23. В. В. Волков, Н. А. Плате, А. Такахара, Т. Кадзияма, Н. Амайя и Ю. Мурата, “ Агрегационное состояние и мезофазная структура гребенчатых полимеров с фторуглеродной боковой группой // Полимер . 33. (6). 1992. С. 1316–1320.https://doi.org/10.1016/0032-3861(92)

    -Z24. Т. Симидзу, Ю. Танака, С. Куцумидзу и С. Яно, “ Упорядоченные структуры поли(1H,1H,2H,2H-перфтордецил α-замещенного акрилата)S // Макромоль. Симп. 82 (1), 173–184 (1994). https://doi.org/10.1002/masy.19940820118 На рис. 5(b) слева показана усредненная интенсивность анализируемой рентгеновской дифракции, а на рис. 5(b) справа показаны дифракционные интенсивности типичных трех пикселей. Эти временные траектории интенсивностей дифракции были использованы для анализа АКФ, а усредненные кривые АКФ показаны на рис.5(с). На рисунке 5 (d) показаны гистограммы для рассчитанных констант затухания АКФ, а их медианные значения были оценены с помощью подгонки Коши-Лоренца (таблица S3). Коэффициент вращательной диффузии PC 8 FA был определен как 0,81 пм 2 /с. Эти результаты предполагают, что фторалкильные группы в боковой цепи PC 8 FA движутся или колеблются в очень плотно агрегированном состоянии, обычно называемом кристаллическим состоянием в пикометрическом масштабе. Константа затухания АКФ PC 8 FA уменьшалась при увеличении размера биннинга от 1 × 1 до 2 × 2, но не менялась при увеличении размера биннинга от 2 × 2 до 3 × 3.Этот результат показывает, что размер молекулярной внутренней динамики для ПК 8 ТВС примерно соответствует размеру пикселя 2 × 2. Был оценен коэффициент вращательной диффузии (D R ) ПК 8 ТВС с биннингом 2 × 2. быть 15.29 2 /с (табл. II). Значение D R для ПК 8 FA больше, чем для BSA (0,73 пм 2 /с). Причина такого, казалось бы, противоречивого поведения может заключаться в том, что молекулы БСА могут быть закреплены на субстрате с помощью нескольких остатков лизина [Figs.3(а) и 3(б)], что физически подавляет его вращательное движение. Таким образом, необходимо хорошо продумать способ крепления молекул к подложке, что может повлиять на молекулярное движение. В текущем исследовании мы измерили молекулярное движение различных типов образцов в лаборатории. Такое движение молекул можно измерить с помощью микроскопии сверхвысокого разрешения (SRM) 25,26 25. E. Betzig, Г. Х. Паттерсон, Р. Сугра, О. В. Линдвассер, С. Оленыч, Дж.С. Бонифачино, М. В. Дэвидсон, Дж. Липпинкотт-Шварц и Х. Ф. Гесс, « Визуализация внутриклеточных флуоресцентных белков с нанометровым разрешением», Science 313 (5793), 1642–1645 (2006). https://doi.org/10.1126/science.112734426. С. Дж. Сахл, SW Ад и С. Якобс, “ Флуоресцентная наноскопия в клеточной биологии // Нац. Преподобный Мол. Клеточная биол. 18 (11), 685–701 (2017). https://doi.org/10.1038/nrm.2017.71 и спектроскопию флуоресцентного резонансного переноса энергии (FRET). 27 27. Р. Рой, С. Хонг и Т. Ха, “ Практическое руководство по одномолекулярному FRET», Nat. Методы 5 (6), 507–516 (2008). https://doi.org/10.1038/nmeth.1208 Максимальное разрешение этих методов составляет нанометровый порядок. Напротив, DXB может отслеживать пикометрический порядок молекулярного движения. Кроме того, SRM и FRET не могут измерять ни полукристаллический полимер, ни белок в кристалле. Таким образом, можно сказать, что лабораторный DXB является перспективным методом и предоставит новую информацию для понимания молекулярного поведения.

    Метод малоуглового рассеяния рентгеновских лучей для характеристики молекулярных взаимодействий: доказательство концепции

    Мы суммируем метод на рис. 1с. Нацеленные зонды прикрепляются к интересующим биомолекулам. Профиль SAXS I ( q ) раствора, содержащего биомолекулы, которые могут взаимодействовать, измеряют с использованием лабораторных приборов или ускорителя. Если пренебречь эффектом рассеяния от биомолекул, интенсивность рассеяния представляет собой сумму вкладов зондов, связанных с невзаимодействующими (ni) и взаимодействующими (i) биомолекулами, следующим образом:

    , где ω — концентрация популяций, которая включает взаимодействующие частицы и взаимодействующие частицы с распределением межцентровых расстояний зонда, с .Картина рассеяния анализируется для получения функции распределения парных расстояний p ( r ), которая представляет взвешенное по электронной плотности распределение расстояний r между парами точек в частице и функции распределения концентрации , ω. Определение ω i ( s ) дает дополнительную пространственную информацию о взаимодействии. Однако ω i ( s ) несет дополнительную сложность в случаях, когда в интересующее взаимодействие вовлечено более двух зондов (например,g., если одна или несколько биомолекул имеют несколько активных сайтов связывания), где пики распределения становятся менее отчетливыми, а анализ становится менее точным. Полезно, хотя и не обязательно, иметь априорную информацию о тестируемой предполагаемой взаимодействующей системе, включая размер биомолекулы и количество сайтов связывания, чтобы помочь провести анализ данных. Производные величины включают распределение расстояния между зондами, пространственную модель взаимодействия и долю взаимодействия:

    Пространственная модель зонда (например,g., модель шарика 35 ) может быть дополнена биомолекулярными моделями 36 для дополнительной информации.

    Для демонстрации проверки концепции была разработана модельная система на основе ЗНЧ (диаметром 10–17 нм), покрытых 10% HSPEGNH 2 и димеризованных с использованием ДМС в воде, что представляет собой единственный сайт связывания. Модельную систему испытывали при различных объемных соотношениях мономеров и димеров. В дополнение к измерениям модельной системы в водном фоне, фон клеточного лизата использовался для имитации типа условий рассеяния, которые могут возникнуть в клеточной среде.Сначала мономеры смешивали непосредственно с лизатом и характеризовали с помощью SAXS. Затем из-за конкуренции восстановителя лизата с тиолированным ПЭГ, используемым для связывания димеров, мономеры и димеры характеризовали с использованием отдельного капилляра для лизата (действующего в качестве фона).

    Подготовка образца

    ЗНЧ диаметром приблизительно 15 нм (оценка с помощью просвечивающего электронного микроскопа, ПЭМ, изображения) ЗНЧ были синтезированы по методу Френса-Туркевича 37,38 . 100 мл раствора 0.6  мМ HAuCl 4 нагревали до температуры кипения с обратным холодильником. Затем добавляли 2,5 мл 5% цитрата натрия и смесь перемешивали в течение 20 мин. Размеры зонда GNP измеряли с помощью динамического рассеяния света (DLS). Димеры GNP получали путем функционализации зондов с помощью HS-PEG-NH 2 и последующего связывания их с помощью DMS длиной 1,1 нм (Pierce Biotechnology Inc., Рокфорд, Иллинойс, США) (рис. 2). Растворы HS-PEG-NH 2 и HS-PEG-OMe готовили путем растворения 0,008 г и 0,050 г соответственно в 10 мл воды.Предварительно смешивали 2,34 мл раствора HS-PEG-NH 2 и 4,68 мл раствора HS-PEG-OMe, затем добавляли к 80 мл растворов зондов GNP. Смесь перемешивали в течение примерно 4 часов. Обмен лиганда подтверждали с помощью DLS для наблюдения за изменением размера и дзета-потенциала. Всего 0,0021 г ДМС растворяли в 1 мл триэтаноламинового буферного раствора (pH 8), а затем 0,156 мл этого раствора добавляли к 5 мл раствора функционализированных ЗНЧ. Смесь перемешивали в течение ночи.Образование димеров наблюдали с помощью DLS. Было приготовлено пять образцов: раствор зонда, раствор димера и три смеси растворов зонда и димера с различной объемной долей раствора димера (0,33, 0,50 и 0,66). Раствор зонда разбавляли до тех пор, пока интенсивность рассеяния, наблюдаемая в SAXS, не совпадала с интенсивностью рассеяния, измеренной для раствора димера, при углах рассеяния, указывающих на сферическую частицу (приблизительно от 0,2 до 0,6 нм -1 ). Как только были достигнуты соответствующие разведения, растворы димера и зонда смешивали.

    Рисунок 2

    Система модели взаимодействия.

    ( a ) Схематическое изображение синтеза модельной системы. ПЭМ-изображение мономеров ( b ) и димеров ( c ), представляющих невзаимодействующие и взаимодействующие виды соответственно.

    Лизат состоял из клеток E. coli BL21(DE3)pRILP из клеточного осадка массой 16,61 г, суспендированных в 50 мл лизирующего буфера. Буфер для лизиса состоял из 20 мМ трис pH 8,0, 30 мМ NaCl, 1 мМ DTT, 0,1% Tween 20, 25 мкг лизоцима (MP Biomedicals, 4 мкл), бензоназы (Sigma-Aldrich, 250 ед/мкл), без EDTS. Полная коктейльная таблетка с ингибитором протеазы (Roche).Клетки сначала суспендировали в лизирующем буфере повторным пипетированием. Затем раствор обрабатывали ультразвуком с использованием ультразвукового аппарата Q Sonica Q700. Затем этот клеточный лизат разбавляли 1:2 (лизат к воде) для экспериментов по рассеянию. Для измерений мономеров, смешанных непосредственно с лизатом, были приготовлены три раствора: неразбавленные мономеры в воде, смесь мономеров и лизата 1:1 и смесь разведенных мономеров и лизата 1:1 (в воде) и лизата, что привело к получению конечного мономера. концентрация 1:19. Для измерений с мономерами/димерами в отдельном капилляре мономеры и димеры хранили в водном растворе (аналогично экспериментам с водным фоном) в капилляре отдельно от лизата.

    Измерения SAXS

    Для всех измерений SAXS использовалась система SAXSpace (Anton Paar, Ashland, VA, USA). Прибор, в котором используется излучение Cu K α (λ = 0,154 нм), был настроен на режим коллимации блочной линии Kratky с доступным диапазоном q 0,0732–1,66 нм. Система оснащена ПЗС-камерой с шагом пикселя 24  мкм в массиве 2084 × 2084 пикселей. В камере используется люминофорный экран Gd 2 O 2 S:Tb, согласованный с рентгеновским излучением 8 кэВ.Образцы загружаются в систему через кварцевый капилляр диаметром 1 мм, расположенный на расстоянии 305,3 мм от ПЗС и поддерживающий температуру 18°С. Коллимационная система, камера с образцом и тракт пучка находились в вакуумированном пространстве с давлением ниже 3 мбар. Пиксели ПЗС были разделены по длине луча (2  см). Для каждого измерения было получено 2400 кадров с экспозицией 1 с и усреднено. Профиль луча, темнота, буфер, зонд, димер и три смеси зонда и димера (0.33, 0,50 и 0,66 объемной доли раствора димера) измерения были получены в тот же день. Буфер (деионизированная вода) измеряли в тех же условиях, что и образец.

    Для измерений мономеров, смешанных непосредственно с лизатом, настройки SAXS были скорректированы на время экспозиции 2,75 с и минимум 200 кадров. Буфер состоял из лизата и деионизированной воды (заменяющей раствор мономера) и измерялся в тех же условиях, что и образец. Чтобы подтвердить, что димеры можно наблюдать на фоне лизата, были внесены изменения в измерение рассеяния, поскольку восстанавливающий агент в буфере, используемом для лизиса клеток (DTT), конкурирует с тиолированным ПЭГ, используемым для связывания димеров.Была сконструирована реализация, не требующая прямого смешивания димеров с лизатом. Лизат клеток запечатывали воском в кварцевом капилляре с наружным диаметром 1 мм и толщиной стенки 0,01 мм (от Hampton Research, Алисо Вьехо, Калифорния, США) и помещали на пути рентгеновского луча между оригинальным держателем капиллярных клеток и ПЗС-камера. Капилляр для лизата помещали примерно в 6 мм от раствора мономера/димера. Буфер состоял из той же установки, но раствор мономера/димера был заменен деионизированной водой.Для измерений лизата настройки SAXS были скорректированы на время экспозиции 6 с и минимум 150 кадров. Время экспозиции было увеличено за счет увеличения интенсивности рассеяния лизатного фона. Капиллярная температура была снижена до 14 °C.

    Альтернативные методы характеристики

    Помимо SAXS, для характеристики проб также использовались DLS и TEM. Для DLS использовали Malvern Zetasizer Nano ZS (Вустершир, Великобритания). Три измерения были получены для 1 мл каждого образца и усреднены.Оценки размера были получены по количеству %. Для ПЭМ использовали JEOL JEM-1400 (Пибоди, Массачусетс, США) при напряжении 80 кВ. Каплю раствора образца объемом 10 мкл помещали на медную сетку 200 меш с углеродной пленкой Electron Microscopy Sciences (Hatfield, PA, USA).

    Анализ данных

    Картины рассеяния были получены с использованием программного обеспечения SAXSdrive (Anton Paar, Ashland, VA, USA), а анализ данных был выполнен с использованием пользовательских кодов Matlab и C++. Кривые рассеяния образца и буферного раствора вычитали по измерениям в темноте с последующим масштабированием (при необходимости) и вычитанием буфера из рассеяния образца.Метод косвенного преобразования Фурье (IFT) 39 был реализован с 20 сплайнами от 0 до D max , что определяется как априорная оценка наибольшего парного расстояния в частице. D max был первоначально оценен, а затем скорректирован до тех пор, пока p ( r ), показанный рядом с D max , не стал резко снижаться, становиться отрицательным или колебаться 40 . Мы использовали 29 различных значений стабилизации, α, из 10 n для n  = −4, −3.5, −3, …, 10, что, как мы обнаружили, является достаточным диапазоном для нахождения подходящего α и набора весов. Подходящее выбранное значение α определяли с помощью следующих процедур, описанных Glatter et al. 39 Значение α для раствора зонда равнялось 5 и находилось в диапазоне от 2,5 до 4,5 для раствора димера и смесей. Шариковые модели выбранных кривых рассеяния были получены с использованием программного пакета ATSAS 35,41 . Каждая модель была сгенерирована из 20 запусков DAMMIF 42 , которые были усреднены с использованием DAMAVER 43 .

    Для нашей модельной системы доля взаимодействия (уравнение (2)) эквивалентна концентрации димеров по сумме димеров и мономерных зондов. Концентрации оцениваются путем подгонки измеренного профиля рассеяния интересующей системы к ряду базовых функций рассеяния, как будет описано ниже. Общий обзор задействованных этапов показан на рис. 3. Сначала измеренное рассеяние от зондов было подобрано и очищено с использованием метода IFT для определения I ni .Набор базовых функций рассеяния (для различных s ) был затем рассчитан с использованием следующего уравнения 44 ,

    Рисунок 3

    Блок-схема процедур анализа данных.

    Верхний индекс * используется для обозначения размытых данных. Шаги, которые включают †, необходимы только для системы SAXS с линейной коллимацией и могут быть проигнорированы при использовании точечной коллимации.

    Диапазон с был выбран таким, чтобы он находился между 17 нм ( с мин  = 2 ×  D макс датчика, что не может быть минимально достижимым расстоянием между датчиками) 50 нм ( с макс ) с шагом 1 нм.

    Размытие было применено к базисным функциям, чтобы они были совместимы с измеренным разбросом для интересующей выборки, которая также была размазана. Размытие применялось следующим образом 45 ,

    , где верхний индекс * используется для обозначения размытых функций. P ( t ) представляет собой трапецеидальную аппроксимацию профиля длины балки, а t выражается в нм −1 . Затем базисные функции были собраны в матрицу,

    Веса для измерений зонда, димера и смешанных образцов были решены с использованием неотрицательного приближения наименьших квадратов 46 на основе уравнения.(1),

    , где I * — измеренная интенсивность рассеяния, все веса больше или равны 0, и

    , где верхний индекс T указывает транспонирование. Уравнение (6) соответствовало области q от 0,0732–0,39 нм -1 с Δ q , равным 0,0032. Этот диапазон q был выбран потому, что он содержал отличительный признак в профиле рассеяния, указывающий на димеры. В качестве альтернативы обсуждаемому здесь методу для определения ω можно использовать существующие методы 47 для анализа смесей интенсивностей рассеяния.

    После определения весов доля взаимодействия для интересующего образца была рассчитана по уравнению. (2). Чтобы определить стандартное отклонение оценок доли взаимодействия, профили рассеяния измеряли пять раз для трех растворов: раствор зонда, смешанный раствор с объемной долей димера 0,5 и раствор димера. Стандартное отклонение (±1) рассчитывали из результирующих долей взаимодействия пяти измерений.

    Соответствие доли взаимодействия как функции объемной доли раствора димера ( x ) определяли следующим образом: «d») содержал смесь мономеров и димеров.Это соответствие объясняет возможные различия в концентрациях растворов мономера и димера. Подгонка и коэффициент детерминации, R 2 , были определены с использованием набора инструментов подбора кривой в Matlab.

    Рентгенологическое исследование стопы (для родителей)

    Что такое рентген?

    Рентген — это безопасный и безболезненный тест, при котором используется небольшое количество радиации для получения изображения костей, органов и других частей тела.

    Рентгеновское изображение черно-белое.Плотные части тела, такие как кости, блокируют прохождение рентгеновского луча через тело. На рентгеновском снимке они выглядят белыми. Мягкие ткани тела, такие как кожа и мышцы, пропускают лучи рентгеновского излучения. На изображении они выглядят темнее.

    Рентгеновские снимки обычно делают в кабинетах врачей, рентгенологических отделениях, центрах визуализации и кабинетах стоматологов.

    Что такое рентген стопы?

    При рентгенографии стопы рентгеновский аппарат посылает пучок излучения через стопу, а изображение записывается на специальную рентгеновскую пленку или компьютер.На этом изображении показаны мягкие ткани и кости стопы, включая кости предплюсны (задняя часть стопы), плюсневые кости (передняя часть стопы) и фаланги (пальцы).

    Рентгенолог сделает снимок стопы: 

    • спереди (переднезадний вид или AP)
    • сбоку (вид сбоку)
    • под углом (косой вид)

    Иногда врачи запрашивают рентгеновские снимки противоположной (неповрежденной) стопы для сравнения.

    Рентген стопы делается, когда ребенок сидит на столе. Они должны оставаться неподвижными в течение 2–3 секунд, пока делается каждый рентгеновский снимок, чтобы изображения были четкими. Если изображение размыто, рентгенолог может сделать еще одно.

    Зачем делают рентген стопы?

    Рентген стопы может помочь врачам найти причину боли, чувствительности, отека или деформации. Он может показать сломанные кости или вывихнутые суставы. После того, как сломанная кость вправлена, рентген может показать, выровнены ли кости и правильно ли они зажили.

    Рентген может помочь врачам спланировать операцию, когда это необходимо, и проверить результаты после нее. Он также может помочь обнаружить кисты, опухоли и инфекции костей на более поздних стадиях.

    Что делать, если у меня есть вопросы?

    Если у вас есть вопросы о рентгенографии стопы или о том, что означают результаты, поговорите со своим врачом.

    X Marks the Spot — Early X


    Развитие брекетов Martin

    Брекеты Martin произошли от лестничных брекетов, использовавшихся на венских гитары, которые Мартин научился собирать еще до приезда в США, к любителям крепление, полученное от испанских гитар, до нескольких вариантов крепления X прежде чем остановиться на «зрелом» шаблоне X, который используется до сих пор.

    К.Ф. Мартин построил свои первые гитары в 1830-х годах по той же лестнице. подтяжки на гитарах его наставника Штауффера в Венском традиция.

    Мартин с. 1833 Stauffer

    Мартин c. 1837 Hudson Street

    К 1840-м годам Мартин обнаружил гитары, произведенные в Испании. традиция, с веерными брекетами.

    Jose Recio, CADIZ

    Louis 18 0002

    Louis 18 0002

    Martin & Coupe 1840-е годы

    Schmidt & Maul 1844

    Schmidt & Maul 1844

    Martin & Cousa Goncalo Alves Spanish

    Martin продолжение веерные скобы на многих их гитарах через конца века, включая уникальные гитары в стиле «Ренессанс».

    Мартин Ренессанс 1840-х годов

    Эта презентация 1840-х годов в испанском стиле. тройная сторона.

    Martin 1840, испанская презентация

    Martin 1840, гибрид X

    Martin & Coupa 1840, гибрид X

    полоса тона, пересекающая верхние стороны большого X, образуя меньший X на высоких частотах гитары.

    Martin 1840’s Alternate X

    В этой гитаре 1847 «AlternateX» Schmidt & Maul используется очень аналогичная концепция, построенная на основе распорки вентилятора с тональной планкой пересечение тройной лопасти вентилятора, чтобы сформировать меньший X на высоких частотах сторона гитары.

    Schmidt & Maul 1847 Alternate X

    Этот c. 1847 Мартин, с большинством стилистических черт испанского Гитара стиля, но с Х-образной распоркой, была названа по крайней мере одним ранний эксперт Мартина, возможно, самый ранний из известных Мартинов, показавший полный «Mature X» в том виде, в каком он существует сегодня.

    Martin 1840’s Spanish Mature X

    Эта презентация Martin 1850’s Ivory Fingerboard Presentation сохраняет тон планка и скоба для пальцев на тройной стороне.

    Martin 1850’s Ivory Fingerboard Presentation

    В 1916 году Мартин начал производить гавайские гитары для компании Ditson. и Музыкальные магазины Южной Калифорнии, которые были первыми магазинами Мартина. Каталог гитар со стальными струнами. Интересно, что в то время как у Мартина построили X-образные гитары с конца 1840-х годов для большей части их лучших струнные гитары, Мартин решил вернуться к креплению вентилятора для своих первые стальные струны.

    Martin 1916 Ditson 2

    Martin продолжал строить свои гитары с «подтяжкой от эскимо» для поддержка под накладкой лада на всех их гитарах с 12 ладами.

    Martin 1929 000-28

    OM, первая из шестиструнных 14-ладовых гитар Мартина, не имела «подпорка для эскимо» впереди резонаторного отверстия. Мартин скоро обнаружил, однако, что трещины образовались вдоль грифа, и снова добавил распорку для эскимо в начале 1930-х годов. стал «задним подкосом», с крестовиной X, расположенной дальше назад из звукового отверстия.У одиночных 0 и двойных 0 Мартинов были свои расчалки перенесли в 1936 году, при этом 000 и Дредноут стали «задними сдвинуты» в середине 1938 года. осмотр, измерение линейками, интерьерные фотографии, рентген, «Хенкограммы» и подсветку внутренней части гитары, чтобы можно увидеть и отметить тени брекетов.

    Я измеряю формы и размеры верха раскосы с помощью штангенциркуля, линейки, калибра Хаклингера и Рентгеновские снимки и добавит диаграммы поперечного сечения, показывающие контуры Верхние брекеты скоро.

    Вот схема Stauffer Style Martin, самого раннего из известных Мартин с. 1833.

    Первые гитары Мартина имели лестничные распорки.

    Мартин с. 1833 Stauffer Style

    нижний бой переходит на диагональ.

    Martin 1837 Hudson Street Guitar

    Jose Recio из Кадиса, Испания

    C.F. На Мартина повлияли гитары Кадиса, Испания, заимствованные раскос вентилятора с тремя лопастями.

    Вполне возможно, что C.F. Мартин впервые познакомился с испанским Стиль гитары в честь Тринидада Уэрта, который был женат на дочери Луи Панормо, плодовитый мастер, создававший гитары в испанском стиле в Лондон, был первым классическим гитаристом, выступившим в США. США еще в 1825 году, а также много гастролирует по Европе.

    Louis Panormo 1832 Гитара в испанском стиле

    А вот схема очень раннего испанского стиля Martin & Coupa 1840-х годов с распорками вентилятора:

    Martin & Coupa 1840-х годов в испанском стиле

    Этот испанский Schmidt & Maul 1840-х годов почти идентичен испанский Martin & Coupa с креплением вентилятора.

    Schmidt & Maul 1840-х гг. Испанский стиль:

    Этот Martin & Coupa 1840-х гг. трехлопастный вентилятор.

    Этот необычный «Ренессансный» Мартин 1840-х годов является ранним примером об использовании Мартином пятилопастного вентилятора.

    Презентация Мартина 1840-х годов с испанской распоркой веера добавляет высокие частоты боковая скоба пальца к пятилопастному вентилятору.

    На этом раннем снимке Martin и Coupa показано то, что я называю распорками «Hybrid X». по сути, ранняя комбинация крепления вентилятора и X-образного крепления:

    Martin & Coupa c. 1845 «Hybrid X»

    Этот ранний Martin 1-28 середины 1840-х показывает то же самое. «Hybrid X» крепится как Martin & Coupa, вариант, который также можно увидеть в Шмидт и Мол того времени.

    Мартин 1-28 гр. 1845 «Hybrid X»

    Мартин 1840-х годов демонстрирует еще один ранний вариант X-образной распорки с тональная полоса, проходящая через скобку X, образуя вторую меньшую букву X на тройная сторона.

    Этот Schmidt & Maul 1840-х годов имеет вариант X-образной распорки с аналогичная концепция, с тональной полосой, проходящей через один вентилятор вентилятора распорки, чтобы сформировать еще один меньший X на тройной стороне.

    Здесь мы видим Мартина около 1845 года со зрелой X-образной распоркой, пример считается, возможно, самым ранним известным примером.

    Эта презентация 1850-х годов Martin с грифом цвета слоновой кости поддерживает полоса тона и скоба для пальца на стороне высоких частот.

    Мартин вернулся к расчалкам вентилятора, как ни странно, за первую сталь струнные гитары, гавайские гитары, сделанные для Ditson и Southern Калифорнийские музыкальные магазины.

    C. F. Martin, Schmidt & Maul и разработка Скобы

    Интересно, что и Мартин, и Шмидт и Мол, бывшие Сотрудники Martin работали параллельно, создавая гитары с точным одинаковые вариации.Неизвестно, являются ли фирмы сотрудничали или соревновались, или если один копировал другой.

    Джордж Мол и Луис Шмидт были двумя первыми сотрудниками C.F. Мартин в Нью-Йорке, которые остались друзьями, а позже работали наверху в том же Здание в Нью-Йорке в роли Джона Купы, дистрибьютора Мартина в время. Schmidt & Maul продолжали продавать гитары в Нью-Йорке. после того, как Мартин переехал в Черри-Хилл, штат Пенсильвания, в 1839 году. многие конструктивные особенности с Мартином.

    К тому времени, когда Мартин открыл для себя гитары в испанском стиле в начале 1830-х годах Шмидт и Мол также строили очень похожие дома в испанском стиле. гитары.

    В середине 1840-х оба C.F. Мартин, Шмидт и Мол были создание гитар, которые экспериментировали с рядом различных вариации креплений, которые привели к зрелому X-образному креплению», то есть стандарт почти для всех гитар со стальными струнами сегодня. я назвал это сначала сформируйте «гибрид X», так как он показывает элементы как крепления вентилятора, так и Х распорка.По сути, он состоит из двух внешних лопастей распорка вентилятора по обеим сторонам узкой полноразмерной распорки X. Этот точно такую ​​же конфигурацию можно увидеть на гитарах этого периода, построенных с «Мартин», «Мартин и Купа» и «Шмидт и Мол» имена, в том числе Мартин, построенный для виртуозной мадам. Де Гони.

    Большинство самых важных прорывов Мартина в области дизайна на самом деле произошло от учителей или магазинов, которые продавали гитары, таких как Гарри Хант в Дитсоне, Фрэнк Харт в Southern California Music, Вахда Олкотт-Бикфорд, Уильям Дж.Смит, Эл Эспозито из Carl Fischer Inc., Перри Бектель из Cable Piano и Уильям Фоден. Мадам ДеГони заказал гитары как у Martin, так и у Schmidt & Maul примерно в в то же время оба начали строить с ранней вариацией Х-образных распорок, гибрид с узким X между двумя внешними лопастями вентилятора. Так что вполне возможно, что это была ее идея, и ее просто реализовали оба. строители одновременно.

    Интересно, были ли Шмидт и Мол мистеромБодрящие гуру Мартина поскольку Шац был необходим для создания гитар Мартина в 1830-х годах, и Дейхманн был в 1900-х годах. Неизвестно, были ли Мартин и Шмидт и Мол либо соперничали, либо сотрудничали, поскольку все Записи Мартина того периода утеряны, я полагаю, слишком много общего с их гитарами, чтобы их не было сотрудничали, так как фотографии этого раннего испанского Шмидта и Мола вместе сторона испанского Martin & Coupa выше покажет.

    На этой испанской гитаре Martin 1840-х гг. ниже мостовой пластины проходит через тройную сторону X образуя второй меньший X, аналогично Шмидту и Мол вверху имеет полосу тона, которая пересекает тройную лопасть вентилятора.

     


     

    Следует отметить, что появляются варианты, основанные на вентиляторе, в то время как другие варианты основаны на большом X.

    Это варианты X-образных распорок, которые нам известны:

    — полувентилятор/половина X на Lark St.1845 Шмидт и Мол и далее гибрид-X Мартин выше.

    -вентилятор с тональной полосой под мостовой пластиной, пересекающей ВЧ лопасти вентилятора, образующие маленький X на тройной стороне на этом 1847 г. Шмидт и Мол.

    — Большая крестообразная скоба с тональной пластиной под пластиной моста, пересекающей тройная сторона X, чтобы сформировать второй меньший X.

    — двойной X на Мартине Фреда Остера, проиллюстрированном в новом Лонгворте.

    — алмаз вокруг пластины моста на Мартине, который появился на the Martin Guitar Forum

    Ни один из Мартинов не датирован, так что мы до сих пор не знаем, кто что сделал X первый.


      К. Ф. Мартин 1840-е гг. Испанский размер 1, стиль 28

    У этого Мартина, вероятно, первая вариация крестообразных распорок который появляется примерно в то же время на горстке Мартина, Мартина & Coupa и гитары Schmidt & Maul в 1840-х годах. Гитары Schmidt & Maul с такой распоркой были замечены датированные 1845 и 1848 гг. Испанская гитара

    Schmidt & Maul

    1852 Schmidt & Maul

    Эта ранняя вариация Schmidt and Maul, датированная 1 84 годом с маленьким X на тройной стороне, образованной поперечной распоркой пересечение тройной лопасти вентилятора.

    Схемы крепления 12 и 14 ладов

    Эти схемы крепления должны помочь проиллюстрировать развитие 14 лад Мартин.

    Здесь вы можете увидеть разницу между 1928 и 1928 годами «вперед» сдвинутые X-образные скобки», и X-образные скобки на 1944, которые были перемещены еще раньше, изменение, которое произошло в 1938 году на дредноутах Martin.

    Нажмите на схему, чтобы загрузить ее в масштабе 1:1.

    Эти диаграммы являются собственностью Роберта Корвина, защищены авторское право, и мое не будет продано. У вас есть мое разрешение на загрузите эти диаграммы и распечатайте их для личного использования.

    1929 000-28

    1930 ОМ-28

    Верхний контур вверху показывает форму верхнего хвата на 1933 г. OM-28, иллюстрирующий меньшую и более округлую верхнюю часть раннего оригинальный ОМ-28.

    1944 000-18


    Ортезы для спины Early Martin

    В этой таблице показаны стили корсетов для спины, которые могут видел на нескольких моих гитарах Martin до 1889 года, и расстояние между 12-м ладом и первой задней скобкой, и к каждой последующей задняя распорка.

    Я начал изучать эти задние скобы как еще один элемент, который может дать окно в то, как развивался дизайн гитар Мартина, с надеждой что закономерности могут появиться, чтобы помочь нам определить даты раннего Мартины, особенно второй половины XIX века. которые имеют несколько функций, которые помогут нам определить даты их производство.

    Изучая результаты, мы действительно видим появление закономерностей. То самые ранние мартины, которые появляются после того, как C.Ф. Мартин переходит из венского влияния, а в отношении его собственного дизайна под испанским влиянием есть только два маленькие подтяжки для спины. В середине 1840-х годов мы начинаем видеть некоторые гитары с довольно высокими тонкими расчалками в одиночку. В 1850-х годах мы начинают видеть две короткие V-образные скобки в сочетании с двумя полукруглыми. По мере того, как мы продвигаемся дальше в 1850-е годы, модель из двух V-образных и двух плоские брекеты становятся стандартом. Образец из двух меньших раскосы и три полукруглые раскосы появляются близко, если не на время регистрации в 1867 году и доминирует до конца век.


    Назад расстояние между раскосами от 12 лада Назад Распорка тип
    Штауффер 1830 4 4 5/8 4,5

    3 широкие круглые столешницы
    Мартин и купа 9 4


    2 тонких 5/8″ V
    Мартин и купа 4.25 4 3/8 4,5 3
    2 широкие 1/2″ V, 1 полукруглая, 1 Плоский 6 x 3/4 дюйма
    Мартин & Купа Коа 4 5/8 3 7/8 4,5

    3 широкие круглые столешницы
    Мартин & Купа Коа






    Мартин 1837 Хадсон стрит 4 4.75 4,75

    3 3/8″ полукруглый
    Мартин 1840 2.5-21






    Мартин 1840 испанский 3 8 3/8 4 1/8


    2 тонкие 9/16″
    Мартин 1845 Испанский 1 Alt X 4 3/8 3.75 3,5 3,5


    Мартин 1846 1 испанский 2,25 4 3/8 3 3/8 3,75
    2 тонких 9/16″, 2 плоских
    Мартин 3-24 4 5/8 3 7/8 4 1/2

    3 1/2″ V
    Мартин 1850 1-21 зиг 2 1/8 4 1/8 2 5/8 5 7/8
    2 коротких V, 2 полукруглых
    Мартин 1850 1-26 zz топ 2 3/8 4 3

    широкий 1/2″ V, короткий V, плоский
    Мартин 1850 1-28 жемчуг 2 3.5 4 5
    2 короткий V, 2 полукруглых
    Мартин 1850 1-28 прл зз 2,25 3 5/8 4 4,5
    2 короткий V, 2 полукруглых
    Мартин 1850 1-28 Диапазон 5 3/8 4.25 4,25

    3 тонких 9/16″ В
    Мартин 1850 2,5-20 2 1/8 4 3 1/4 4 3/8
    2 В, 2 квартира
    Мартин 1850 2.5-24 3,75 3,5 3,5 3,5
    4 тонкий5/8″
    Мартин 1850 2.5-24 Гур 3 3/8 3,5 3,5 3,5
    4 тонких 9/16″
    Мартин 1850 слоновая кость FB 4 3/8 3.75 4,5

    3 1/2 дюйма
    Мартин 1850 Ренессанс 8,5 4,5 1 3/8

    2 тонких 9/16″, 1 1/4 короткий
    Мартин 1850 2.5-27 2,5 3 7/8 4,25 4
    2 В, 2 квартира
    Мартин 1855 2 — 23 л Д 2,25 4,5 4 4
    2 В, 2 квартира
    Мартин 1855 2-23 дк Д 2.5 4,25 4 4
    2 В, 2 квартира
    Мартин 1855 2-27 1,75 4 4 4
    2 В, 2 квартира
    Мартин 1860 2 1/2 20 2 1/8 3 5/8 3 3/8 4.25
    2 В, 2 квартира
    Мартин 1860 2 22 2 1/8 4 5/8 3,75 3 7/8
    1 5/8″ В, 3 кв
    Мартин 1860 2-23 экз.? 4.75 4,5 4,75

    3 1/2″ шириной V
    Мартин 1867 0-34 3,75 3 3/8 3,25 3,5 3,5 2 короткая V, 3 полукруглых
    Мартин 1870 1-28 2 4.25 2,5 3,5 3,5 2 круглый верх, 3 полукруглых
    Мартин 1870 2 1/2 — 26 2 1/8 3,25 3,25 3,25 3,25 2 круглый верх, 3 полукруглых
    Мартин 1870 2-27 1 7/8 4.25 2,5 3,25 3,25 2 круглый верх, 3 полукруглых
    Мартин 1874 1-28/26 2,25 4,25 2,5 3,5 3,5 2 круглый верх, 3 полукруглых
    Мартин 1880 0-34 2.25 3,75 3 1/8 4 3 2 круглый верх, 3 полукруглых
    Мартин 1880 1-21 инл ПГ 2 3/8 3,75 2 5/8 2,5 3,5 2 круглый верх, 3 полукруглых
    Мартин 1889 2-34 2.75 3,25 2,75 3,25 3,25 2 круглый верх, 3 полукруглых
    Мартин 1890 1-21 наследство 1,75 4 3/8 2,5 3,5 3,5 2 круглый верх, 3 полукруглых
    Мартин 1893 2-27






    Мартин 1893 2.5-17 2 3/8 3 1/8 2  7/8 3 3 3 9/16″ V, 2 полукруглых
    Мартин 1894 0-42






    Мартин 1894 1-26 2.5 3 5/8 2 5/8 3,5 3,5 2 1/2 дюйма V, 3 полукруглых
    Мартин 1896 2 1/2 — 42 2,5 3 1/8 2,75 3,5 3,5 2 1/2 дюйма V, 3 полукруглых
    Мартин 1897 1-21 дк топ






    Мартин 1898 1-21 #8275 2 7/8 3 5/8 2.75 3 3 2 1/2 дюйма V, 3 полукруглых
    Мартин 1899 0-28 #8562
    3,25 2 5/8 3,5 3,5 2 1/2 дюйма V, 3 полукруглых
    Шмидт & Мол 1847 4.5 2 3/8 4,25

    3 толще высокий

    Зубчатые и конические скобы

    Я помню, как впервые услышал о довоенных Мартинах и о том, как они «фестончатые» подтяжки, отличавшиеся от современных «прямые» брекеты в том смысле, что они были очерчены, чтобы сделать их легче масса.Лишь относительно недавно это стало общеизвестным что первые «прямые» брекеты сделаны после перехода от зубчатые подтяжки в 1945 году на самом деле были коническими, что делало их легче, чем более поздние прямые брекеты.

    Заметив, что у мартинов 1945 года прекрасный, отчетливый, пробивной звук, Я провел дальнейшее расследование и обнаружил, что конические брекеты в 1945 года были уникальными, с более тонкой конусностью, чем в предыдущие годы. конические брекеты были сняты с производства в конце сороковых годов, что дало им гитары своим характерным звучанием.

    конические брекеты Martin в 1945 году

    1945 D-18

    1945 D-18

    конические брекеты Martin в 1946 году, которые намного круглые, чем в 1945 году.

    1946 000-18

    -18

    в середине 1939 года Мартин сдвинул положение пересечения X на гитарах размера 000 и дредноутах примерно на один дюйм ниже край звукового отверстия примерно на 1 3/4 дюйма назад, движением, известным как Распорки «Forward X» или «High X» к «Rear X», чтобы сделать верхнюю часть более стабильный.Некоторые игроки предпочитают звук более ранней версии, что делает эти гитары очень востребованными, в то время как некоторые считают более поздняя версия легче «микрофон».

    Положение скобок на 14 ладу 00 Martins изменено в 1935. 12 ладовых мартинов без изменений.

    Примерно в 1958 году крепление дредноутов снова изменилось, начиная с задней смещенный X на немного менее смещенный назад X с более широким поперечным углом.

    Обратите внимание, что в середине 1939 года большинство Мартинов добавили «подтяжку для эскимо» на при этом верхняя поперечная распорка была увеличена с 5/16″ до 1/2″ по ширине.

    Эти изменения, по-видимому, произошли одновременно с изменением ширины горловины. изменен с 1 3/4 дюйма на 1 11/16 дюйма, а блок шеи на дредноутах изменен толщиной от 1 9/16 дюйма до 1 5/16 дюйма.

    1931 или 1932:
    Трапециевидные пластины шириной 1 дюйм к шестигранным пластинам шириной 1 3/8 дюйма

    Середина 1935:
    Сдвинутые вперед скобки на 12 ладу 00 Martins

    Смещенные вперед 7 Середина 1938: 907 назад подтяжки на 000 и Dreadnaught Martins

    Середина 1939:
    Шея от 1 3/4 дюйма до 1 11/16 дюйма
    Добавлена ​​скоба эскимо
    Верхняя поперечная скоба шириной от 5/16 дюйма до ширины 1/2 дюйма (UTB)
    1 9/ Блок шеи толщиной от 16 дюймов до 1 5/16 дюймов на дредноутах, чтобы соответствовать маленькому физически Мартинс.

    1940 или 1941:
    Шестигранная перемычка шириной 1 3/8 дюйма или трапециевидная трапециевидная пластина шириной 1 3/8 дюйма

    1945:
    Зубчатые к конусообразным расчалкам
     
    1958:
    Смещенный X назад со смещением X назад назад более широкий крест angle

     

    Earlymartin.com

    Чтобы увидеть классическую фотографию людей и Музыканты Roots, посетите:

    Для получения информации о Фотография для выставки
    , Публикация, компакт-диски, рекламные акции, веб-страницы, туристические книги,
    для покупки фотографий Распечатки илиЕсли у вас есть вопросы О гитаре Early Martin:

    Электронная почта: Роберт Корвин
    Авторские права на весь сайт © 1998 по 2015 г. Роберт Корвин/Photo-Arts.Все права защищены.

    IJMS | Бесплатный полнотекстовый | Количественный анализ взаимодействия тау-микротрубочек с использованием FRET

    Резонансный перенос энергии флуоресценции (FRET)
    Меченый белок тау (т.е. тау-родамин) использовали в качестве акцептора в исследованиях FRET. Мечение было достигнуто в буфере с почти нейтральным рН, чтобы специфически пометить аминовый конец (т.е. N-конец) тау. Действительно, pKa N-конца пептида ниже, чем pKa лизина, присутствующего в боковой цепи.Перед рассмотрением переноса энергии между этим видом и микротрубочками, стабилизированными с помощью Flutax-2 (т.е. флуоресцентными микротрубочками), которые действуют как донор, была изучена функциональность тау-родамина для индукции образования микротрубочек. Хорошо известно, что тау стимулирует сборку тубулина в микротрубочки при концентрациях тубулина ниже критической концентрации для самосборки тубулина [1]. Рисунок 1 иллюстрирует кинетический анализ раствора 10 мкМ тубулина в присутствии 5 мкМ тау-родамина при 37 ° C.Мутность при 350 нм достигает стационарного значения через 20 мин. По сравнению с периодом действия только 10 мкМ тубулина показано, что тау-родамин в виде немеченого тау индуцирует образование микротрубочек. Это хорошо согласуется с работами Lu et al. [25], которые с помощью эксперимента по седиментации продемонстрировали, что тау-родамин эффективно связывается с собранными микротрубочками. Точно так же турбидиметрический анализ сборки флуоресцентных микротрубочек показал плато поглощения через 20 минут при 37 ° C (данные не показаны).Было показано, что сборка тубулина в присутствии Flutax-2 такая же, как сборка с другим флуоресцентным таксоидом, Flutax-1 [26], за исключением критической концентрации тубулина, которая подобна таксолу (т.е. 1,5 мкМ) [21]. ].

    Рисунок 1. Турбидиметрический анализ, иллюстрирующий кинетическое поведение сборки тубулина (10 мкМ) при 37 °C, индуцированной немеченым тау-белком (5 мкМ) (квадратные символы) и меченым родамином (ромбовидные символы) (5 мкМ) в буфере PG (т.е. 20 мМ NaPi, 1 мМ трис(2-карбоксиэтил)фосфин (TCEP), 0.1 мМ гуанозин-5′-трифосфат (ГТФ), рН 6,5). Кружки представляют раствор 10 мкМ тубулина без тау.

    Рисунок 1. Турбидиметрический анализ, иллюстрирующий кинетическое поведение сборки тубулина (10 мкМ) при 37 °C, индуцированной немеченым тау-белком (5 мкМ) (квадратные символы) и меченым родамином (ромбовидные символы) (5 мкМ) в буфере PG (т.е. 20 мМ NaPi, 1 мМ трис(2-карбоксиэтил)фосфин (TCEP), 0,1 мМ гуанозин-5′-трифосфат (GTP), pH 6,5). Кружки представляют раствор 10 мкМ тубулина без тау.

    Как показано на рисунке 2, флуоресцентные микротрубочки демонстрируют полосу флуоресцентного излучения при 520 нм (λ изб. = 494 нм). Длина волны возбуждения тау-родамина составляет 556 нм, поэтому можно увидеть значительное спектральное перекрытие между двумя флуорофорами. Действительно, при FRET молекулы донора обычно излучают на более коротких длинах волн, и их спектр перекрывается со спектром поглощения акцептора. Интегральное перекрытие, J(λ) из уравнения (2), составляет 1,6 × 10 -13 M -1 · см 3 .Квантовый выход флуоресценции свободного флутакса-2 в отсутствие акцептора был измерен как 0,90 ± 0,02 в буфере NaCl-PG (λ отл = 494 нм). Согласно Лилло и соавт. [27], связанный Flutax-2 демонстрирует квантовый выход, идентичный свободному Flutax-2. Действительно, при pH 7 интенсивность флуоресценции свободного Flutax-2 обусловлена ​​его дианионной формой (pKa = 4,83 [28]), которая является единственной излучающей частицей и мало изменяется при связывании [21]. Поэтому для ΦD было принято значение 0,90. Предполагая, что η равно 1.4, что касается биомолекул в водном растворе и κ2 до 2/3, что подходит для случайного вращения доноров и акцепторов перед передачей энергии [13, 27], расстояние Ферстера, R 0 , равно 52,9 ± 0,1 Å от Уравнение (1). Поскольку R 0 удовлетворяет критерию расстояния между донором и акцептором (т. е. 20–90 Å), возможен перенос энергии. Перенос энергии является результатом диполь-дипольного взаимодействия между двумя видами и может быть определен стационарными измерениями степени тушения донора из-за акцептора.

    Рисунок 2. Нормализованный спектр излучения Флутакса-2, связанного с микротрубочками (λ отн. = 494 нм, λ em = 520 нм) и спектр возбуждения тау-белка, меченного родамином (λ отн. = 556 нм, λ em = 580 нм). нм). Заштрихованная область определяет спектральное перекрытие между излучением донора и поглощением акцептора, молярный коэффициент экстинкции тау-родамина составляет 41,955 M -1 · см -1 при 556 нм.

    Рис. 2. Нормализованный спектр излучения Флутакса-2, связанного с микротрубочками (λ отн. = 494 нм, λ em = 520 нм) и спектр возбуждения тау-белка, меченного родамином (λ отн. = 556 нм, λ em = 580 нм). нм). Заштрихованная область определяет спектральное перекрытие между излучением донора и поглощением акцептора, молярный коэффициент экстинкции тау-родамина составляет 41,955 M -1 · см -1 при 556 нм.

    На рис. 3А показан спектр испускания флуоресцентных микротрубочек, который значительно гасится при добавлении тау-родамина.Пик при 580 нм в спектре излучения комплекса отражает флуоресценцию родамина. Чтобы подчеркнуть передачу энергии, было зарегистрировано возбуждение флуоресценции комплекса при λ em 580 нм (рис. 3B). Как сказано в Albani et al. [29], при отсутствии донорно-акцепторного переноса при максимальном излучении родамина (т.е. λ em = 580 нм) спектр возбуждения должен быть идентичен спектру поглощения тау-родамина. Напротив, видна полоса при 494 нм, соответствующая спектру возбуждения донора.

    Рисунок 3. ( A ) Нормализованный спектр излучения флуоресцентных микротрубочек в буфере NaCl-PG (т.е. 25 мМ NaPi, 25 мМ NaCl, 1 мМ TCEP, 0,1 мМ GTP, pH 7) в отсутствие (– –) или в присутствии (·· · и ―) тау-родамина (т.е. 5 и 18 мкМ соответственно), записанные с длиной волны возбуждения 494 ​​нм. Концентрация тубулина составляла 5 мкМ; ( B ) Нормированный спектр возбуждения комплекса, состоящего из флуоресцентных микротрубочек и тау-родамина, демонстрирующий перенос энергии между двумя флуорофорами.Используемая длина волны излучения составляла 580 нм.

    Рисунок 3. ( A ) Нормализованный спектр излучения флуоресцентных микротрубочек в буфере NaCl-PG (т.е. 25 мМ NaPi, 25 мМ NaCl, 1 мМ TCEP, 0,1 мМ GTP, pH 7) в отсутствие (– –) или в присутствии (·· · и ―) тау-родамина (т.е. 5 и 18 мкМ соответственно), записанные при длине волны возбуждения 494 ​​нм. Концентрация тубулина составляла 5 мкМ; ( B ) Нормализованный спектр возбуждения комплекса, состоящего из флуоресцентных микротрубочек и тау-родамина, демонстрирующий перенос энергии между двумя флуорофорами.Используемая длина волны излучения составляла 580 нм.

    Эффективность переноса энергии, E из уравнения (3), определяли линейной экстраполяцией к нулевой концентрации акцептора с использованием значений интенсивности флуоресценции донора при 520 нм с поправкой на эффект внутреннего фильтра (уравнение (5)). Используемый молярный коэффициент экстинкции равен 8624 M -1 · см -1 при 494 нм (λ отл. ) и 20,983 M -1 · см -1 при 520 нм (λ em ). График зависимости 1/E от 1/[акцептор] дает эффективность FRET 47% ± 3% (рис. 4).Расстояние r между донором и акцептором было рассчитано как 54 ± 1 Å. Данные суммированы в таблице 1 (с использованием MT-(Flutax-2) в качестве аббревиатуры для Flutax-2, связанного с микротрубочками).

    Рисунок 4. Определение эффективности переноса энергии Е между флуоресцентными микротрубочками и тау-родамином. График представляет собой прямую линию, где точка пересечения с осью у составляет 1/E (= 2,12) при бесконечной концентрации акцептора.

    Рисунок 4. Определение эффективности переноса энергии Е между флуоресцентными микротрубочками и тау-родамином.График представляет собой прямую линию, где точка пересечения с осью у составляет 1/E (= 2,12) при бесконечной концентрации акцептора.

    Таблица 1. Расчетные параметры получены из спектрального анализа белковой смеси.

    Таблица 1. Расчетные параметры получены из спектрального анализа белковой смеси.
    DONOR Acceptor E [%] R 0 R R [Å] R [Å] R [Å]
    MT- (Flutax-2) A Tau-Rhodamine б 47 ± 3 52.9 ± 0,1 54 ± 1
    На рис. 5 изображена модель стенки микротрубочки, где Flutax-2 показан красным внутри поры между двумя димерами тубулина [30]. Поскольку молекулярная трехмерная структура тау-белка остается неизвестной [31], тау представлен его флуоресцентной частью (т.е. 5,6-TAMRA), соответствующей его N-концевому домену. Стрелкой показан радиус (т. е. 54 ± 1 Å) сферы, в центре которой находится молекула Flutax-2. Положение Flutax-2 обеспечивает прямой доступ для передачи энергии к объему раствора и, в частности, к молекулам тау-родамина.Мы изучили связывание дериватизированного тау на предварительно сформированных микротрубочках, стабилизированных Флутаксом-2. Допущено, что в этих условиях тау связывается с внешней поверхностью стенки микротрубочек [8,23,24,32]. Как следствие, внутреннюю поверхность микротрубочек сферы можно было исключить. ЯМР-исследование [11] показало, что связывающий домен четырех микротрубочек иммобилизуется на поверхности микротрубочки, а N-концевой домен тау выступает из нее. Совсем недавно Magnani et al. [33] показали, что N-концевая часть тау вовлечена в связывание С-концевого домена субъединицы Р150 динактинового комплекса.Используя электронную микроскопию и иммуноэлектронную микроскопию, они предложили модель, в которой проекционный домен тау находился примерно в 40 Å от стенки микротрубочки. Их открытие свидетельствует в пользу расстояния, найденного FRET в этом исследовании.

    Рисунок 5. Представление Ван-дер-Ваальса внешней поверхности фрагмента (два димера тубулина) модели микротрубочек высокого разрешения. Флатакс-2 показан красным между двумя субъединицами тубулина. Тау иллюстрируется его флуоресцентной частью родамином.Стрелка представляет собой радиус сферы с центром на доноре (т. е. связанном Flutax-2), на котором был обнаружен акцептор (т. е. тау-родамин). Этот радиус равен 54 ± 1 Å.

    Рисунок 5. Представление Ван-дер-Ваальса внешней поверхности фрагмента (два димера тубулина) модели микротрубочек высокого разрешения. Флатакс-2 показан красным между двумя субъединицами тубулина. Тау иллюстрируется его флуоресцентной частью родамином. Стрелка представляет собой радиус сферы с центром на доноре (т.е., связанный Flutax-2), на котором был обнаружен акцептор (т. е. тау-родамин). Этот радиус равен 54 ± 1 Å.

    .

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.