Разное

Параметры лада гранта: Технические характеристики LADA Granta универсал

Содержание

Технические характеристики Лада Гранта 2018

Lada Granta относится к одной из популярных моделей отечественного производителя. Автомобиль, появившийся на свет в конце 2011 г., сразу же стал хитом продаж. Секрет успеха заключается не только в низкой стоимости. Машина представляет собой переработанную версию Калины, отвечает мировым стандартам и отличается надёжностью и экономичностью эксплуатации. Характеристики Лада Гранта 2018 – наглядное подтверждение потенциала модели.

  • Базовое шасси Калина было полностью модернизировано.
  • Коснулись изменения не только кузова, но также салона, технической базы и электроники.

Даже несмотря на выход Lada Vesta, Granta по-прежнему сохраняет актуальность и пользуется спросом у дилерских центров, которые продают модель по доступной цене.

Сегодня доступно несколько комплектаций автомобиля. Это классический седан, лифтбек и хэтчбек. Последние версии вышли сравнительно недавно и относятся к 2014 году.

Машины различаются разве что внешним видом и рядом интерьерных новинок. В остальном модели идентичны и соответствуют классической комплектации автомобиля. Модификации разделяются на стандартную, норму, люксовую и спортивную.

Экстерьер и интерьер

  1. Особенностью становится наличие бамперов, которые окрашиваются в цвет кузова.
  2. Ходовые огни дневного типа находятся прямо в фаре.
  3. Машина поставляется с 13 дюймовыми штампованными диска.
  4. Также стоит уделить внимание молдингам на решетке радиатора и дверях, зеркалах, покрашены под цвет кузова, чёрных рамках дверных створок.
  5. Люксовые комплектации идут с 15 или 14 дюймовыми дисками.

Интерьер машины минималистичен, но в тоже время обеспечивает необходимый комфорт и уют. Двери обиваются декоративными вставками из искусственного материала. Спинка заднего сидения разделена. Производитель снабжает машину дополнительными уплотнителями для порогов, а также организует компактный контейнер для очков. Это приятное дополнение в летнюю погоду, когда защититься от солнца без очков невозможно.

Ко всему прочему стоит отметить, что машина имеет грамотную герметизацию. Отсутствие зазоров и швов исключает проникновение холода и постороннего шума. В том числе это исключает наличие неприятного запаха. В просторном салоне не будет наблюдаться запахов токсичных жидкостей, жженой резины и других «городских» ароматов. Это особенно важно в летнее время, когда жара делает поездки в пробках невыносимыми. При движении в активном транспортом потоке – Lada Granta идеальный автомобиль, который обеспечивает стабильную и эффективную работу климат системы.

Комфортабельные дополнения

В люксовой комплектации машина снабжается большим количеством приятных дополнений. Это электронные новинки. Можно регулировать руль по высоте, использовать электроусилитель руля, передние и задние подъемники. Примечательно, что машина поставляется с атермальными стёклами, что делает Гранту идеальным вариантом для использования в зимний сезон. Производитель изначально адаптирует машину к особенностям сурового русского климата.

  • Помимо климатической системы с кондиционером автомобиль снабжается воздушным фильтром.
  • Присутствует электропривод замка багажника, обогрев наружных зеркал.
  • Передние сидения также могут быть снабжены функцией подогрева. Это обеспечивает идеальные условия и температуру в салоне в сезон экстремальных заморозков.

Основу медиа системы составляет бортовой компьютер. Это профессиональная платформа, имеющая массу функций. Речь идёт о дистанционном управлении замками, центральном замке, охранной сигнализации. Кроме того, в бортовом компьютере встроена аудиосистема, отличающаяся массой настроек и регулировок. Качественная акустика салона становится выгодным преимуществом.

В чем плюсы Лады Гранты?

Потратить деньги на Гранту выгодно. Эта машина, которая доказала свою эффективность успешными продажами. Надо сказать, что это одна из совершенных разработок российского производителя. Гранта уступает разве что новой Весте. На борту машины присутствуют современные системы, компьютерные механизмы, продуманная безопасность. Это авто, которое подойдёт как для ежедневных поездок на работу, так и для загородных путешествий.

Не менее важным преимуществом становится низкая стоимость. Производитель изначально позиционирует машину как народный автомобиль. Выгодное соотношение цены и качества не ударит по карману, поможет получить автомобиль, неприхотливый в обслуживании. Сервис Гранты не станет причиной больших затрат. Благодаря использованию современных запчастей и техники обеспечивается долгосрочная надёжность автомобиля. Надо сказать и то, что инженеры изначально адаптировали машину к капризам непогоды и экстремальным условиям, которые проявляются в зимний сезон.

Технические характеристики Лада Гранта (ВАЗ (Lada) Granta) 2015 годов выпуска

ВАЗ (Lada) Granta Sport Drive Active 1.6 МТ механика бензин седан, 1596 см3, 105 л.с., 2011 — 2018 г.вседан1596 см3105 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Classic Start 1.6 АМТ робот бензин лифтбек, 1596 см3, 106 л.с., 2011 — 2018 г.влифтбек1596 см3106 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Classic Start 1.6 АМТ робот бензин седан, 1596 см3, 106 л.с., 2011 — 2018 г.вседан1596 см3106 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Comfort Optima 1.6 АМТ робот бензин лифтбек, 1596 см3, 106 л.с., 2011 — 2018 г.влифтбек1596 см3106 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Comfort Optima 1.6 АМТ робот бензин седан, 1596 см3, 106 л.с., 2011 — 2018 г.вседан1596 см3106 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Comfort Optima 1.6 МТ механика бензин лифтбек, 1596 см3, 106 л.с., 2011 — 2018 г.в лифтбек1596 см3106 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Comfort Optima 1.6 МТ механика бензин седан, 1596 см3, 106 л.с., 2011 — 2018 г.вседан1596 см3106 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Luxe 1.6 АМТ робот бензин лифтбек, 1596 см3, 106 л.с., 2011 — 2018 г.влифтбек1596 см3106 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Luxe 1.6 АМТ робот бензин седан, 1596 см3, 106 л.с., 2011 — 2018 г.вседан1596 см3106 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Luxe 1.6 МТ механика бензин лифтбек, 1596 см3, 106 л.с., 2011 — 2018 г.влифтбек1596 см3106 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Luxe 1.6 МТ механика бензин седан, 1596 см3, 106 л.с., 2011 — 2018 г.вседан
1596 см3
106 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Luxe Prestige 1.6 АМТ робот бензин лифтбек, 1596 см3, 106 л.с., 2011 — 2018 г.влифтбек1596 см3106 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Luxe Prestige 1.6 АМТ робот бензин седан, 1596 см3, 106 л.с., 2011 — 2018 г.вседан1596 см3106 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Luxe Prestige 1.6 МТ механика бензин лифтбек, 1596 см3, 106 л.с., 2011 — 2018 г.влифтбек1596 см3106 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Luxe Prestige 1.6 МТ механика бензин седан, 1596 см3, 106 л.с., 2011 — 2018 г.вседан1596 см3106 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Norma Classic+ 1.6 АМТ робот бензин лифтбек, 1596 см3, 106 л.с., 2011 — 2018 г.влифтбек1596 см3106 л.с.
2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Norma Classic+ 1.6 АМТ робот бензин седан, 1596 см3, 106 л.с., 2011 — 2018 г.вседан1596 см3106 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Norma Comfort+ 1.6 АМТ робот бензин лифтбек, 1596 см3, 106 л.с., 2011 — 2018 г.влифтбек1596 см3106 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Norma Comfort+ 1.6 МТ механика бензин лифтбек, 1596 см3, 106 л.с., 2011 — 2018 г.влифтбек1596 см3106 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Norma SE + 1.6 MT механика бензин седан, 1596 см3, 106 л.с., 2011 — 2018 г.вседан1596 см3106 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Norma SE + 1.6 АMT робот бензин седан, 1596 см3, 106 л.с., 2011 — 2018 г.вседан1596 см3106 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Sport 1.6 МТ механика бензин седан, 1596 см3, 114 л.с., 2011 — 2018 г.вседан1596 см3114 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Sport Luxe 1.6 МТ механика бензин седан, 1596 см3, 114 л.с., 2011 — 2018 г.вседан1596 см3114 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Sport Light 1.6 MT механика бензин седан, 1596 см3, 118 л.с., 2011 — 2018 г.вседан1596 см3118 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Sport Luxe 1.6 MT механика бензин седан, 1596 см3, 118 л.с., 2011 — 2018 г.вседан1596 см3118 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta 1.6 МТ механика бензин седан, 1596 см3, 82 л.с., 2011 — 2018 г.вседан1596 см382 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Classic 1.6 MT механика бензин лифтбек, 1596 см3, 87 л.с., 2011 — 2018 г.в лифтбек1596 см387 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Classic 1.6 МТ механика бензин седан, 1596 см3, 87 л.с., 2011 — 2018 г.вседан1596 см387 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Classic Start 1.6 МТ механика бензин лифтбек, 1596 см3, 87 л.с., 2011 — 2018 г.влифтбек1596 см387 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Classic Start 1.6 МТ механика бензин седан, 1596 см3, 87 л.с., 2011 — 2018 г.вседан1596 см387 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Comfort 1.6 МТ механика бензин лифтбек, 1596 см3, 87 л.с., 2011 — 2018 г.влифтбек1596 см387 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Comfort 1.6 МТ механика бензин седан, 1596 см3, 87 л.с., 2011 — 2018 г.вседан1596 см387 л.с.
2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Luxe 1.6 MT механика бензин лифтбек, 1596 см3, 87 л.с., 2011 — 2018 г.влифтбек1596 см387 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Luxe 1.6 MT механика бензин седан, 1596 см3, 87 л.с., 2011 — 2018 г.вседан1596 см387 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Norma Classic 1.6 MT механика бензин седан, 1596 см3, 87 л.с., 2011 — 2018 г.вседан1596 см387 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Norma Classic 1.6 МТ механика бензин лифтбек, 1596 см3, 87 л.с., 2011 — 2018 г.влифтбек1596 см387 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Norma Classic+ 1.6 МТ механика бензин лифтбек, 1596 см3, 87 л.с., 2011 — 2018 г.влифтбек1596 см387 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Norma Classic+ 1.6 МТ механика бензин седан, 1596 см3, 87 л.с., 2011 — 2018 г.вседан1596 см387 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Norma Comfort 1.6 MT механика бензин лифтбек, 1596 см3, 87 л.с., 2011 — 2018 г.влифтбек1596 см387 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Norma SE 1.6 MT механика бензин седан, 1596 см3, 87 л.с., 2011 — 2018 г.вседан1596 см387 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Standart 1.6 МТ механика бензин лифтбек, 1596 см3, 87 л.с., 2011 — 2018 г.влифтбек1596 см387 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Standart 1.6 МТ механика бензин седан, 1596 см3, 87 л.с., 2011 — 2018 г.вседан1596 см387 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Standart Plus 1.6 MT механика бензин седан, 1596 см3, 87 л.с., 2011 — 2018 г.вседан1596 см387 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Comfort 1.6 АТ автомат бензин лифтбек, 1596 см3, 98 л.с., 2011 — 2018 г.влифтбек1596 см398 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Comfort 1.6 АТ автомат бензин седан, 1596 см3, 98 л.с., 2011 — 2018 г.вседан1596 см398 л.с.2011 — 2018
ВАЗ (Lada) Granta Norma SE 1.6 AT автомат бензин седан, 1596 см3, 98 л.с., 2011 — 2018 г.вседан1596 см398 л.с.2011 — 2018

Лада гранта параметры. Параметры и технические характеристики лада гранта

Из статьи -, вы узнаете о принципиально новой разработке АвтоВАЗа — Лада Гранта. Познакомимся с техническими данными новой модели,узнаем о достоинствах, существующих недостатках автомобиля, его комплектациях, другими особенностями характеристики Лада Гранта.

Нужно отметить совершенно новый подход к проектированию, производству и маркетингу автомобиля.

Впервые «новорожденного» показали широкой публике еще летом 2011 года. Тогда седан вызвал неподдельный интерес, настолько разительно он отличался от прежних классических образцов отечественного автопрома.

Характеризуя Ладу Гранта, надо сказать, что автомобиль действительно получился новый, от классики в нем не осталось ничего, кроме двигателей некоторых комплектаций, да фирменного вазовского шильдика. Гранта построена на базе «Калины» с применением технологий Рено. Конструкторам пришлось одновременно работать над устранением «калиновских болячек» и делать совершенно новый автомобиль. К чести заводчан, можно сказать, что это получилось.

Ко времени написания статьи, уже выпущена новая модификация Калины —

Отличный, удобный и поистине огромный «бардачок», подстаканники, ниши и кармашки – несомненный плюс при характеристике салона Гранты, отмеченный даже самыми неисправимыми скептиками. В сравнении с «Калиной» -это небо и земля.

Светотехника выше всяких похвал, регулировки механические и вполне адекватные, размер фар весьма внушителен. Они, кстати, как и вся светотехника, не унифицированы, а специально разработаны под Гранту. Включаются фары не подрулевым переключателем, а на панели.

Отмеченные недостатки Лады Гранта:

Передние кресла низкого качества, неудобные и нефункциональные.

В автомобиле отсутствует потолочные ручки. Это из серии – экономия до абсурда.

Стекла передних дверей не опускаются до конца. На съемках программы «Большой тестдрайв», посвященной Ладе Гранте, произошел конфуз: переднее пассажирское стекло при закрытии двери разлетелось вдребезги. Причем, будучи полностью опущенным… С остеклением дверей у Гранты -видимо пока проблема. По отзывам владельцев, часто стекла дверей могут самопроизвольно опускаться даже от тряски.

Невнятное сцепление, «схватывающее» в произвольном месте.

— «вылет» передач на неровной дороге при подъеме, шумность МКПП.

Часто выходит из строя генератор.

Lada Granta представляет собой «недорогой» автомобиль «субкомпактной категории», который в своё время заменил в «палитре АвтоВАЗа» сразу три устаревшие модели («Классику», «Самару» и трёхобъёмную «Калину» первого поколения), являясь, по сути, «продуктом» глубокой «модернизации и оптимизации» последней – о чём свидетельствует тот факт, что 70% компонентов у них унифицированы.

Впервые публика услышала о «новом тольяттинском бюджетнике» в мае 2011 года – именно тогда и состоялась официальная презентация седана (на разработку которого у тольяттинского автогиганта ушло несколько лет), а через два года к нему присоединился и пятидверный лифтбек… На сегодняшний день этот автомобиль «B-класса» является не просто «неоспоримым бестселлером» марки «Lada», но и одним из самых продаваемых «игроков бюджетного сегмента» на отечественном рынке в целом.

Он же стал первым серийным продуктом АвтоВАЗа оснащённым автоматической коробкой передач (в дальнейшем «автомат» появился и на других «Ладах»).

В 2015 году «Granta» стали оснащать «роботизированной МКПП» (разработана совместно с ZF), которая вытеснила «автомат Jatco» из перечня комплектаций.

В первый же месяц с начала продаж седана — очереди за ним растянулись на 3-4 месяца вперед. Впрочем и спустя 5 лет он остаётся одним из лидеров продаж.

По результатам краш-теста (по методике ARCAP), проведенного изданием «Авторевю» в 2012 году, «Гранту» признали самой безопасной моделью АвтоВАЗа.

Четырёхдверке досталось от «Калины» (первого поколения) порядка 70% всех комплектующих и деталей.

Эта четырёхдверка дебютировала в августе 2011 года (на автошоу в Москве), а ровно через семь лет пережила серьезный рестайлинг. В её арсенале присутствуют: симпатичный дизайн, хороший уровень практичности, выбор из трёх бензиновых моторов и неплохое оснащение.

Особенности

Настройка передней подвески . У Лады Гранты настройки передней подвески зависят от комплектации автомобиля. Так, в стандартном оснащении «Гранта» лишена усилителя руля и получает кастер, равный 1°40’. В версиях с оснащением «Норма» и «Люкс» кастер увеличивается до 2°45’, плюс автомобиль дополняется усилителем руля, что в сумме позволяет улучшить курсовую устойчивость с одновременным повышением управляемости.

Настройка задней подвески . Задняя подвеска «Гранты», впервые в истории АвтоВАЗа, получила отрицательный угол развала колес (-1°), не требующий дальнейшей регулировки. Данное решение, вкупе с положительным схождением (+10’), обеспечивает улучшение устойчивости автомобиля на любом типе дорог.

Багажник . При объеме в 520 литров у седана и 440 литров у хэтчбека, багажный отсек этой модели выгодно отличается от конкурентов удобной компоновкой внутреннего пространства, а также погрузочной шириной и высотой.

Парусность кузова . Главный конструктивный «недочет» Granta – «непропорциональное» сотношение ширины кузова и его высоты, из-за чего на скорости свыше 100 км/час (особенно при боковом ветре) заметно снижается устойчивость автомобиля при совершении маневров.

Покраска кузова . Несмотря на все заявления АвтоВАЗа, качество лакокрасочного покрытия кузова оставляет желать лучшего. Заявленный срок службы – ЛКП не выдерживает: по поверхности всего кузова регулярно появляются сколы. Решить данную проблему можно только постоянной подкраской проблемных мест или полной перекраской кузова более качественным ЛКП.

Плохая обзорность через заднее стекло . Заднее стекло седана не позволяет четко отслеживать габариты автомобиля при маневрах на парковке. Решить проблему поможет установка парктроника.

Запуск двигателя в холодное время . Для запуска двигателя «Гранты» при отрицательных температурах рекомендуется сделать паузу в несколько секунд после включения зажигания. Это время необходимо бензонасосу для поднятия давления в топливной рампе.

Запотевание стекол или проникновение пыли в салон во время движения. Это довольно распространенные проблемы, которые решаются простым способом – включением отопителя на малой скорости.

Запотевание задних фонарей во время дождя. Очень часто задние фонари автомобиля начинают запотевать во время дождя. Для устранения данной проблемы необходимо прочистить вентиляционные отверстия в корпусе фонарей.

Стук передних стоек марки «СААЗ». Данная конструктивная особенность, к сожалению, устраняется только самостоятельной заменой стоек на более качественные аналоги.

Четкое ощущение вибраций двигателя на холостом ходу . Причиной появления вибраций может служить прослабление креплений подушек двигателя. Устраняется конструктивный недочет при помощи регулярного контроля надежности затяжки креплений подушек.

Повышенная вибрация двигателя . Фиксируемая даже визуально повышенная вибрация двигателя во время его работы может быть следствием износа цилиндропоршневой группы или прогара клапанов. Устранить данный дефект возможно лишь проведением соответствующего ремонта двигателя. При этом появление «несвойственных вибраций» после осуществления ремонта опять же возможно из-за неправильной развесовки компонентов цилиндропоршневой группы.

Тугой ход рычага КПП и вой коробки при езде в морозы . Конструктивная особенность практически всех КПП ВАЗовской разработки. Частично устранить проблему можно заменой заводского масла на качественную синтетику не ниже 75w90, которая не будет подмерзать при низких температурах.

Проблемы с закрыванием крышки багажника . При ослаблении крепежа петли замка багажника в процессе эксплуатации этого автомобиля очень часто возникают проблемы с закрытием крышки багажника. Для устранения данного дефекта необходимо регулярно проверять надежность крепления замка багажника и проводить своевременную смазку его механизма.

Стартер продолжает крутить после запуска двигателя . После запуска двигателя, стартер на Granta иногда продолжает крутить ещё несколько секунд. Причиной данной проблемы чаще всего является попавшая грязь или застывшая смазка (в зимнее время), вызывающие залипание втягивающего реле. Лечится проблема очисткой втягивающего от грязи и заменой смазки.

Периодический отказ спидометра , сопровождающийся проблемами с информативностью педали газа. При езде на «Гранте» иногда возникает неприятная проблема, связанная с отказом спидометра, который перестает показывать текущую скорость движения. При этом проблема часто сопровождается изменением поведения педали газа, а иногда ещё и повышением мощности работы усилителя руля, что снижает информативность рулевого управления. Зачастую проблема провоцируется попаданием влаги и грязи на контакты датчика скорости. Для устранения проблемы необходимо прочистить и просушить контакты штекера датчика. Реже проблема вызывается конструктивными неисправностями самого датчика, в этом случае его необходимо заменить.

В местах крепления трескаются патрубки . Довольно часто с конвейера этот автомобиль сходит с перетянутыми патрубками, из-за чего они очень быстро начинают трескаться в местах затяжки. Для устранения данной проблемы необходимо проверить степень затяжки хомутов сразу после покупки автомобиля.

Выплеск бензина при заправке полного бака . Во время заправки автомобиля до состояния «полный бак», при почти полной наполненности бака, происходит незначительный выплеск бензина (около 40-50 грамм) из горловины, после чего бак заполняется окончательно. Данная проблема, к сожалению, является недочетом конструкции бака и в настоящий момент не устраняется.

В данном разделе представлены обзоры различных модификаций и кузовных исполнений Лады Гранты с отзывами владельцев и фотографиями. Рассматриваются ходовые и эксплуатационные качества (тест-драйв’ы) машин этого семейства. Указаны цены на новую Ладу Гранту и их комплектация. А так же основные технические характеристики (максимальная скорость и динамика, двигатели и трансмиссии («механика», «робот», «автомат»), габаритные размеры, объём багажного отделения, дорожный просвет (клиренс) и др).

Характеристики Лада Гранта весьма схожи с характеристиками Лады Калины. Это и не мудрено Lada Granta создавалась на основе Калины. Несмотря на то, что характеристики габаритов этих автомобилей разные, но расстояние от передних до задних колес совершенно одинаковое и составляет 2476. То есть салон Гранты такой же по размеру, как и у Калины . Хотя отделка самого салона Калины и Гранты различна. Кстати, характеристики Лада Гранта в кузове хетчбек уже известны. Напомним, эта версия отечественного автомобиля появится в продаже ближе к лету 2014 года.

Увеличение размеров Granta произошло за счет увеличенного размера багажника, кроме того конструкторы увеличили переднюю часть. В результате получился довольно тесный автомобиль, но с довольно большим багажником, большего от 4-ёх дверного бюджетного седана ждать не стоит. Общая длина Lada Granta составляет 4260 миллиметров .

Габариты, размеры и объемы Лада Гранта

  • Длина – 4 260 мм
  • Ширина – 1 700 мм
  • Высота – 1 500 мм
  • База, расстояние между передней и задней осью – 2 476 мм
  • Колея передних и задних колес – 1430 и 1414 мм соответственно
  • Объем багажника – 520 литров
  • Размер топливного бака – 50 литров

Дорожный просвет Lada Granta с механической коробкой составляет 16 сантиметров (160 мм), клиренс Лада Гранта с коробкой автомат меньше на 2 сантиметра и составляет 14 см (140 миллиметров). Сам производитель объясняет меньший дорожный просвет бюджетного седана с автоматом тем фактом, что масса двигателя в сочетании с АКПП больше.

Масса Лада Гранта составляет 1 160 килограмм, с полной загрузкой 1 560 кг. Производитель указывает, что автомобиль способен буксировать прицеп массой 450 килограмм без собственной системы торможения и 900 кг с тормозным механизмом.

Характеристики трансмиссии Lada Granta следующие. Автомобиль имеет только передний привод и два типа коробок передач, это механическая 5-ступенчатая коробка передач с передаточным числом главной пары 3,7. И автоматическая трансмиссия японского производителя Jatco с передаточным числом 4,1. 4-диапазонный автомат Лада Гранта делает автомобиль намного комфортнее, но за все надо платить, поэтому расход топлива с АКПП больше, а разгон до первой сотни дольше.

Характеристики двигателя Лада Гранта весьма интересная тема для разговора. Сразу скажем у Granta бензиновый мотор работающий на 95-ом бензине имеющий один объем 1,6 литра, точнее 1596 кубических сантиметров. Однако из-за того, что конструкция по сути этого одного двигателя различна, то и показатели расхода, разгона, мощности совершенно различны. Сегодня для Гранты предлагают 4 версии двигателя мощностью 82, 87, 98 и 106 лошадиных сил. Два мотора имеют 8 клапанов, еще два имеют 16-клапанный механизм. Четырехтактный, бензиновый силовой агрегат имеет распределенный впрыск с электронным управлением имеющий различные настройки. В общем двигатель для Гранты инжекторного типа. Современный инжектор, как на большинстве иномарок.

Самый слабый мотор ВАЗ 1,6 с 8 клапанами мощностью 82 лошади устанавливается на Ладу Гранту в минимальной комплектации “стандарт” характеристики этого двигателя следующие –

  • Мощность л.с/кВт – 82/60 при 5100 оборотах в минуту
  • Крутящий момент – 132 Нм при 3800 оборотах в минуту
  • Максимальная скорость – 165 километров в час
  • Разгон до первой сотни – 12,6 секунд
  • Расход топлива в смешанном цикле – 7,4 литра

Более мощный 8-клаппаник Granta объемом 1,6 литра выдает уже 87 лошадиных сил и устанавливается в комплектации “норма”.

  • Мощность л.с/кВт – 87/64 при 5100 оборотах в минуту
  • Крутящий момент – 140 Нм при 3800 оборотах в минуту
  • Максимальная скорость – 167 километров в час
  • Разгон до первой сотни – 12,4 секунд
  • Расход топлива в смешанном цикле – 7,0 литра

Следующий 16-клапанный двигатель мощностью 98 лошадиных сил устанавливают в версиях “норма” и “люкс”. Именно этот мотор сочетается с автоматической трансмиссией Гранты. С механической 5-ступенчатой КПП его тоже устанавливают.

  • Максимальная скорость – 172 километров в час
  • Разгон до первой сотни – 11,4 секунд
  • Расход топлива в смешанном цикле – 6,8 литра

С коробкой автомат характеристики следующие

  • Мощность л.с/кВт – 98/72 при 5600 оборотах в минуту
  • Крутящий момент – 145 Нм при 4000 оборотах в минуту
  • Максимальная скорость – 168 километров в час
  • Разгон до первой сотни – 13,7 секунд
  • Расход топлива в смешанном цикле – 7,6 литра

И самый мощный двигатель Lada Granta имеющий так же 16 клапанов, но выдающий уже 106 лошадиных сил появился недавно и предлагается только в комплектации “люкс” и только с механической коробкой.

  • Мощность л.с/кВт – 106/78 при 5600 оборотах в минуту
  • Крутящий момент – 145 Нм при 4000 оборотах в минуту
  • Максимальная скорость – 177 километров в час
  • Разгон до первой сотни – 11,0 секунд
  • Расход топлива в смешанном цикле – 6,7 литра

Особо хотелось бы отметить показатель расхода топлива Лады Гранты , это очень субъективный фактор зависящий от множества факторов. Во первых, манера езды водителя может увеличить расход топлива, причем заметно. А факторы внешней среды, температуры, состояние дорожного покрытия или даже размера колес и тип покрышек, это все влияет на расход топлива.

Кстати, о колесах, размерах резины и покрышек, которая используется на Ладе Гранта. Колесные диски производитель предлагает как стальные 13 дюймов, так и литые 14 и 15 дюймов. Размер шин и дисков Granta следующий –

  • R13 175/70
  • R14 175/65
  • R14 185/60
  • R15 185/55

Возможных комплектаций ВАЗ Гранта, в которых без труда можно найти оптимальную для себя. Бюджетная стоимость, высокий клиренс Лада Гранта, позволяющий легко преодолевать бездорожье, доступность обслуживания, вместительный салон, огромный багажник — это главные достоинства автомобиля.

Платформой для низкобюджетного переднеприводного автомобиля ВАЗ Гранта поделилась . На сегодняшний день семейство Гранты представлено двумя моделями.

  1. Четырехдверный седан.
  2. Пятидверный лифтбек в трех комплектациях:
  • «стандарт»;
  • «норма»;
  • «люкс».

Технические характеристики Гранты в зависимости от комплектации будут различаться.

Обзор Лада Гранта 219010

Длина кузова седана равна 4260 мм, его ширина — 1700 мм, высота — 1500 мм. Колесная база автомобиля — 2475 мм. Габариты лифтбека отличаются от седана только длиной кузова, которая незначительно уменьшилась и составляет 4246 мм. Объем топливного бака (50 л) одинаковый для всех модификаций. Объем багажного отделения — 480 л для седана, 440 л для лифтбека.

Передние вентилируемые, задние — барабанные. Передняя подвеска независимая, типа McPherson, задняя — пружинная полузависимая. Снаряженная масса — 1115 кг, количество пассажирских мест — 5. Для семейства Гранты предусмотрены три силовых агрегата мощностью от 83 до 106 лошадиных сил (л. с.). Трансмиссия — механика или автомат.

Всего возможно 5 вариантов сочетаний двигателя и трансмиссии, какой из них выбрать, каждый решает в соответствии с собственными требованиями. На минимальную комплектацию «стандарт» устанавливается бензиновый 1,6-л двигатель мощностью в 83 л. с и простая . Максимальная скорость не превышает 164,5 км/ч, разгон до первой сотни занимает 12,5 сек.

Максимальный крутящий момент — 132 Нм с числом оборотов 3500 в мин. Минимальный дорожный просвет — 160 мм. Если автомобиль пустой, то клиренс доходит до 175 мм. Топливо — бензин АИ-95, расход составляет 9,3 л в городском цикле и 6,2 л — на трассе. В смешанном цикле потребление составляет 7,4 л. Содержание вредных веществ в выхлопных газах соответствует стандарту Евро-4.

До упора руль можно выкрутить четырьмя оборотами. Рулевой механизм — рейка-шестерня. Оснащение комплектации включает в себя дневные ходовые огни, полноразмерное запасное колесо, крепления ISOFIX, складываемые задние кресла, подушку безопасности водителя, аудиоподготовку, инерционные ремни безопасности. Всего 16 % из 20 тыс. проданных автомобилей Лада Гранта соответствовали модификации «стандарт». Остальные 84 % принадлежать «норме» или «люкс».

Касательно Гранты лифтбек, ее «люкс» планируют оснащать более мощным двигателем в 106 л. с., который будет связываться только с механикой. На сегодняшний день Гранта лифтбек — это самая мощная машина из этого семейства. Самый слабый мотор для лифтбека — 87 л. с. Так же как и седан, пятидверная Гранта будет оснащаться как МКПП, так и коробкой-автомат.

Вместе с незначительным уменьшением длины кузова, сократились и количество куб. л багажного отделения, и клиренс. Объем багажника лифтбека составляет 440 л. Но при необходимости его вместительность можно легко увеличить, убрав полку или сложив задний ряд кресел. Минимальный клиренс — 140 мм для машин с АКПП, дорожный просвет Гранты лифтбек с механической трансмиссией — 160 мм.

Комплектации «норма» и «стандарт»

Начиная с «нормы» на Гранте устанавливается 4-цилиндровый с рядным расположением цилиндров мотор объемом 1,6 л в 87 л. с., который укомплектован новой пятиступенчатой механической коробкой с тросовым приводом, или 1,6-л двигатель в 98 л. с., оснащенный коробкой-автомат. Для всех версий с АКПП на Гранте устанавливается японский четырехдиапазонный автомат Jatco, разработанный не без участия концерна Nissan.

В отличие от своего «бедного» собрата, Гранта «норма» разгоняется до 100 км/ч за 11,5 сек. выросла до 167 км/ч. При этом расход бензина снизился. Езда в городе затребует 8,5 л, по трассе — 5,8, смешанный цикл потребляет 7,2 л топлива. Максимальный крутящий момент — 143 Нм, 3 500 об/мин. Число оборотов руля сократилось до 3-х. Такие показатели, как клиренс, стандарт безопасности выхлопа, механизм рулевого управления, остались теми же, что и в комплектации «стандарт».

Опциональное оснащение Гранты «норма» значительно прибавило. В дополнение к тому, что имеется в «стандарте», базовое оснащение средней комплектации включает трехточечные инерционные ремни безопасности с индикатором непристегнутого ремня, иммобилайзер, гидравлический корректор фар, бортовой компьютер, первичный инструмент, сервосистема рулевого управления (электро), регулируемая в двух плоскостях рулевая колонка, воздушный фильтр, центральный замок, передние электростеклоподъемники.

По желанию и в зависимости от платежеспособности покупателя авто можно доукомплектовать подушкой безопасности переднего пассажира, системами ABS+BAS, атермальными стеклами, кондиционером, заменить инерционные ремни на ремни с преднатяжителем. Лада Гранта стала первым российским авто, на который серийно устанавливается коробка-автомат. Но если «норму» предпочитают покупать в основном на механике, то в продажах «люкса» лидирует АКПП.

Лада Гранта в «люксовом» исполнении имеет под капотом 1,6-литровый 90-сильный двигатель или заимствованный от Приоры 16-клапанный агрегат мощностью 98 л. с. Именно второй мотор можно укомплектовывать коробкой-автомат. Основные характеристики (габариты, клиренс, объем топливного бака, вместимость багажного отделения, «длина» руля, тип подвески, тормозная система) совпадают с «нормой». Максимальная скорость Лады Гранта — 168 км/ч. Расход топлива 8,8/5,9/7,4 л для городского, загородного и смешанного режимов соответственно.

Разгонять машину с коробкой автомат до сотни нужно будет не менее 13 сек. Базовое оснащение дополнено мультимедийным комплексом с четырьмя динамиками, противотуманными фарами, ЦЗ с пультом дистанционного управления, датчиком парковки, теплопоглощающими стеклами с тонировкой, электростеклоподъемниками «в круг», обогревом передних сидений, электроприводом зеркал, датчиком света и дождя, сигнализацией. Дополнительное оборудование: парктроник, климат-контроль, расширенная шумоизоляция. На этом технический обзор Гранта закончен. Удачи на дорогах!

Размерные параметры автомобиля влияют как на удобство езды по городу или бездорожью, так и на комфортабельность проводимых поездок.

Для современной Лада Гранта габаритные размеры подобраны таким образом, чтобы владельцы могли перемещаться по любым трассам, перевозить объемные грузы.

Не меньшее внимание разработчики уделили и обустройству салона. Параметры сидений, их расположения обеспечивают водителю и пассажирам благоприятные условия нахождения в транспорте.

Внешние габаритные размеры Лады Гранты

Параметры кузова относительно предшественника Лады Калины несколько отличаются. Длина Гранты составляет 4260 мм, что на 220 мм больше. Ширина Гранты равняется 2476, правда всего лишь на 6 мм больше “калиновской”. За счет данного увеличения размеров стал большим и объем багажного отделения. Например, для Калины универсал начальный показатель составляет лишь 355 л, для Гранты – 440 л.

Высота модели равна 1,5 м, благодаря чему было достигнуто отличное сочетание вместительного салона и аккуратного внешнего вида. Что касается размеров колесной базы, то ее длина составляет 2476 мм. А ширина передней и задней колеи соответственно равны 1430 и 1426 мм.

Для задняя колея составляет 1414 мм. Такие габаритные размеры Гранта позволяют автомобилю быть более устойчивым и обеспечивать владельцу плавную и аккуратную езду даже по некачественным дорогам.

Расстояние от передней колеи до переднего бампера равняется 804 мм, а от задней колеи до заднего бампера составляет 980 мм. – 16 см, некоторые модели лифтбек (с АКПП и 1,6 литровым двигателем) имеют дорожный просвет в 14 см. Показатель считается одним из лучших и был перенят у прародителя Лады Калины. Данных параметров вполне достаточно для совершения поездок по:

– Грунтовым дорогам с неровной поверхностью.

– Городским трассам.

– Заснеженным проселочным дорогам.

– Холмам с крутыми склонами.

Внутренние габаритные размеры Лады Гранты

Не менее важными при покупке являются и внутренние параметры. Именно они влияют на удобство нахождения в авто и проведении длительных поездок. Дополнительным плюсом является и возможность многочисленных регулировок положения сидений, если в салоне достаточно места для их перемещения, перестановки и нескольких режимов наклона.

Для стильной Лады Гранта габаритные размеры внутри действительно хорошо продуманы и позволяют всем пассажирам и водителю проводить даже длительные поездки с максимальным комфортом.

Высота от стыка сидения и спинки равняется 910 мм для второго ряда и 990 для передних кресел. Ширина сидений составляет 49 см и 51 см соответственно. Расстояние от сидения второго ряда до первого варьируется от 12 до 33,5 см, что позволяет пассажирам удобно разместиться на креслах.

Высота сидений относительно пола салона для второго ряда равна 34 см, а для первого 28,5 см (подлежит незначительно регулировке). Расстояние от педалей до края сидения может составлять от 33,5 до 56 см.

Габариты являются еще одним преимуществом Гранты. Ширина отделения равна 135 см, но ширина проема намного меньше (95 см), что нужно учитывать при загрузке авто. Глубина багажника составляет 1 м и 2,5 см. Его высота целых 60 см, что позволяет перевозить даже разнообразную бытовую технику без каких-либо проблем.

Параметры руля непременно будут интересны будущему водителю. Ширина передней стойки – 4 см, а вот диаметр рулевого колеса – 37,5 см. Такое расположение весьма удобно и позволяет с легкостью управлять Грантой. Кроме того и все остальные характеристики позволяют осуществлять удобные поездки по любым трассам, с любой загруженностью багажника и любым количеством пассажиров.

ВИДЕО cлабые места Лада Гранта

Технические характеристики Лада Гранта Спорт

Гранта Спорт, технические характеристики которого перечислены ниже, является одной из самых удачных спортивных модификаций ВАЗовских машин. Данное транспортное средство имеет мощный мотор с жидкостной системой охлаждения. Производителем предусмотрена система наддува, что позволяет нагнетать избыточное давление в 1,2 атм.

Анализируя технические характеристики авто, нельзя не уделить внимания системе подрессоривания. Усовершенствованная подвеска располагает регулируемыми стабилизаторами, пружинами специального изготовления, надежными амортизаторами с возможностью настройки характеристик. Снаряженная масса транспортного средства составляет 1080 кг.

Особенности мотора

В описании автомобиля характеристики двигателя имеют первостепенное значение. Силовой агрегат имеет следующие параметры:

  • Рабочий объем – 1,6 литра
  • Лимит мощности – 118 л.с.
  • Максимальный крутящий момент 6750 об/мин
  • Система питания – распределенный впрыск
  • Разгон до «сотни» — 9,5 сек

Несмотря на перечисленные параметры, Lada Granta Sport отличается относительно умеренным расходом горючего. При эксплуатации авто в смешанном цикле потребление топлива составляет около 7,8 литра из расчета на 100 километров пути.

На низких оборотах авто не отличается хорошей тягой, однако после 3000 об/мин транспортное средство полностью раскрывает свой динамический потенциал. Продуманная система забора воздуха обеспечивает эффективное охлаждение ДВС, не позволяя мотору перегреваться в пути. В системе впрыска предусмотрены датчики положения коленвала и дроссельной заслонки.

Динамика и комфорт

При проектировании авто характеристики мотора были не единственной заботой производителя. Транспортное средство должно было получиться не только мощным и динамичным, но и комфортабельным в эксплуатации. Поэтому производитель уделил определенное внимание доработке системы подрессоривания и улучшению шумо- и виброизоляции салона.

Параметры Гранты отвечают ожиданиям наиболее взыскательных автолюбителей. К основным преимуществам этого транспортного средства можно отнести следующие качества:

  • Хорошее сцепление с дорожной поверхностью
  • Вместительный багажник
  • Комфортабельный, просторный салон
  • Приспособленность к вождению в динамичной манере
  • Привлекательный, современный дизайн
  • Великолепный обзор, отсутствие слепых зон
  • Экономичный и надежный мотор

В случае необходимости автовладелец сможет сложить кресла заднего ряда, что позволяет увеличить вместительность багажного отделения. Объем багажника в 480 литров дает возможность транспортировать весьма габаритные грузы. Одним из несомненных преимуществ Lada Granta в модификации «Спорт» является послушное управление. Транспортное средство хорошо держит дорогу даже при передвижении на высокой скорости и в сложных погодных условиях.

Типовые параметры лада гранта

Оптимальная работа автомобильного двигателя зависит от многих параметров и устройств. Для обеспечения нормальной работоспособности моторы ВАЗ оснащаются различными датчиками, предназначенными для выполнения разных функций. Что нужно знать о диагностики и замене контроллеров и каковы параметры датчиков инжекторных двигателей ВАЗ таблица представлена в этой статье.

Типовые параметры работы инжекторных моторов ВАЗ

Проверка датчиков ВАЗ, как правило, осуществляется при обнаружении тех или иных проблем в работе контроллеров. Для диагностики желательно знать о том, какие неисправности датчиков ВАЗ могут произойти, это позволит быстро и правильно проверить устройство и своевременно заменить его. Итак, как проверить основные датчики ВАЗ и как их после этого заменить — читайте ниже.

Основные параметры контроллеров на инжекторных моторах ВАЗ

Особенности, диагностика и замена элементов систем впрыска на ВАЗовских авто

Ниже рассмотрим основные контроллеры!

Холла

Есть несколько вариантов, как можно проверить датчик Холла ВАЗ:

  1. Использовать заведомо рабочее устройство для диагностики и установить его вместо штатного. Если после замены проблемы в работе двигателя прекратились, это говорит о неисправности регулятора.
  2. С помощью тестера произвести диагностику напряжения контроллера на его выводах. При нормальной работоспособности устройства напряжение должно составить от 0.4 до 11 вольт.

Процедура замены выполняется следующим образом (процесс описан на примере модели 2107):

  1. Сначала производится демонтаж распределительного устройства, выкручивается его крышка.
  2. Затем осуществляется демонтаж бегунка, для этого его надо потянуть немного вверх.
  3. Демонтируйте крышка и выкручивается болт, который фиксирует штекер.
  4. Также надо будет выкрутить болты, которые фиксируют пластину контроллера. После этого откручиваются винты, которые крепят вакуум-корректор.
  5. Далее, осуществляется демонтаж стопорного кольца, извлекается тяга вместе с самим корректором.
  6. Для отсоединения проводов необходимо будет раздвинуть зажимы.
  7. Вытаскивается опорная пластина, после чего откручиваются несколько болтов и производителя демонтаж контроллера. Производится монтаж нового контроллера, сборка осуществляется в обратной последовательности (автор видео — Андрей Грязнов).

Скорости

О выходе из строя данного регулятора могут сообщить такие симптомы:

  • на холостом ходу обороты силового агрегата плавают, если водитель не жмет на газ, это может привесит к произвольному отключению мотора;
  • показания стрелки спидометра плавают, устройство может в целом не работать;
  • увеличился расход горючего;
  • мощность силового агрегата снизилась.

Сам контроллер расположен на коробке передач . Для его замены нужно будет только поднять колесо на домкрат, отсоединить провода питания и демонтировать регулятор.

Уровня топлива

Датчик уровня топлива ВАЗ или ДУТ используется для обозначения оставшегося объема бензина в топливном баке. Причем сам датчик уровня топлива установлен в одном корпусе с бензонасосом. При его неисправности показания на приборной панели могут быть неточными.

Замена делается так (на примере модели 2110):

  1. Отключается аккумулятор, снимается заднее сиденье автомобиля. С помощью крестообразной отвертки выкручиваются болты, которые фиксируют люк бензонасоса, снимается крышка.
  2. После этого от разъема отсоединяются все подводящие к нему провода. Также необходимо отсоединить и все патрубки, которые подводятся к топливному насосу.
  3. Затем откручиваются гайки, фиксирующие прижимное кольцо. Если гайки заржавели, перед откручиванием обработайте их жидкостью WD-40.
  4. Сделав это, выкрутите болты, которые фиксируют непосредственно сам датчик уровня топлива. Из кожуха насоса вытаскиваются направляющие, а крепления при этом нужно отогнуть отверткой.
  5. На завершающем этапе производится демонтаж крышки, после этого вы сможете получить доступ к ДУТ. Контроллер меняется, сборка насоса и остальных элементов осуществляется в обратном снятию порядке.

Фотогалерея «Меняем ДУТ своими руками»

Холостого хода

Если датчик холостого хода на ВАЗ выходит из строя, это чревато такими проблемами:

  • плавающие обороты, в частности, при включении дополнительных потребителей напряжения — оптики, отопителя, аудиосистемы и т.д.;
  • двигатель начнет троить;
  • при активации центральной передачи мотор может заглохнуть;
  • в некоторых случаях выход из строя РХХ может привести к вибрациям кузова;
  • появление на приборной панели индикатора Check, однако загорается он не во всех случаях.

Чтобы решить проблему неработоспособности устройства, датчик холостого хода ВАЗ можно либо почистить, либо заменить. Само устройство расположено напротив троса, который идет к педали газа, в частности, на дроссельной заслонке.

Датчик холостого хода ВАЗ фиксируется с помощью нескольких болтов:

  1. Для замены сначала следует выключить зажигание, а также АКБ.
  2. Затем необходимо извлечь разъем, для этого отключаются провода, подсоединенные к нему.
  3. Далее, с помощью отвертки выкручиваются болты и извлекается РХХ. Если же контроллер приклеен, то нужно будет демонтировать дроссельный узел и отключить устройство, при этом действуйте аккуратно (автор видео — канал Ovsiuk).

Коленвала

Датчик коленвала ВАЗ используется для синхронизации работы систем подачи горючего и зажигания. Диагностика ДПКВ может быть произведена несколькими способами.

  1. Для выполнения первого способа понадобится омметр, в данном случае сопротивление на обмотке должно варьироваться в районе 550-750 Ом. Если полученные в ходе проверки показатели немного отличаются, это не страшно, менять ДПКВ нужно в том случае, если отклонения значительные.
  2. Для выполнения второго метода диагностики вам понадобится вольтметр, трансформаторное устройство, а также измеритель индуктивности. Процедура замера сопротивления в данном случае должна осуществляться при комнатной температуре. При замере индуктивности оптимальные параметры должны составлять от 200 до 4000 миллигенри. С помощью мегаомметра производится замер сопротивления питания обмотки устройства в 500 вольт. Если ДПКВ исправный, то полученные значения должны быть не больше 20 Мом.

Чтобы заменить ДПКВ, делайте следующее:

  1. Сначала отключите зажигание и извлеките разъем девайса.
  2. Далее, с помощью гаечного ключа на 10 необходимо будет выкрутить фиксаторы анализатора и произвести демонтаж самого регулятора.
  3. После этого производится монтаж работоспособного устройства.
  4. Если регулятор меняется, то вам нужно будет повторить его первоначальное положение (автор видео о замене ДПКВ — канал В гараже у Сандро).

Лямбда-зонд

Лямбда-зонд ВАЗ представляет собой устройство, предназначение которого заключается в определении объема кислорода, присутствующего в выхлопных газах. Эти данные позволяют блоку управления правильно составить пропорции воздуха и топлива для образования горючей смеси. Само устройство расположено на приемной трубе глушителя, снизу.

Замена регулятора осуществляется так:

  1. Сначала отключите аккумулятор.
  2. После этого найдите контакт жгута с проводкой, эта цепь идет от лямбда-зонда и подключается к колодке. Штекер необходимо отключить.
  3. Когда второй контакт будет отсоединен, перейдите к первому, расположенному в приемной трубе. Используя гаечный ключ соответствующего размера, открутите гайку, фиксирующую регулятор.
  4. Демонтируйте лямбда-зонд и поменяйте его на новый.

Видео «Вкратце о замене датчика распредвала на ВАЗе»

Подробнее о том, где расположен датчик распредвала ВАЗ и как произвести его замену в гаражных условиях, вы можете узнать из ролика ниже (автор видео — Vitashka Ronin).

Контроллер 11183-1411020-51/52 и 11183-1411020-01/02

ПараметрРасшифровкаед. изм.Холостой ход3000 об/мин
TANSТемпература воздухаГрад. С15 — 4515 — 45
TMOTТемпература охл. жидкостиГрад. С90 — 10190 — 101
UBSQНапряжение бортсетиВ13.0 — 14.513.0 — 14.5
WPEDПоложение педали%11 — 15
WDKBAПоложение дросселя%2 — 57 — 11
NSOLЖелаемые оборотыОб/мин8403000
NMOTОбороты двигателяОб/мин840 ±403000 ±100
MIРасход воздухаКг/ч7 — 1227 — 35
ZWOUTУОЗГрд. П.К.В9 ±532 — 35
RL_WНагрузка%16 — 2612 — 17
FHOФактор барокоррекции0.8 — 1.020.8 — 1.02
TIEFFВремя впрыскамсек3.0 — 5.02.8 — 3.5
DMVADАдаптация регулировки ХХ%±5
USVKLСигнал с ДК1В0.01 — 0.890.01 — 0.89
USHKLСигнал с ДК2В0.01 — 0.890.01 — 0.89
FR_WКоэффициэнт коррекции лямбды1.00 ±0.021.00 ±0.02
FRA_WКоэффициэнт адаптации лямбды1.00 ±0.151.00 ±0.15
TATEOUTПродувка адсорбера%0 — 8.20 — 18
MSLEAKКоэфф. адаптации топлива на ХХкг±2.5
MSNDKOПеретечки на ХХкг/ч2 — 8
DTPPSVKMFПериод 1-го ДКсекПримечание:

* Все параметры приведены для положительной температуры окружающего воздуха. Значения параметров носят рекомендательный характер

Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2

Приложение 3 к ИП 59-10 лист 1

Таблица 5 Перечень параметров, отображаемых диагностическим прибором и используемых для диагностики ЭСУД с а/м LADA KALINA и LADA SAMARA с контроллерами М74 20-51/52 и 20-01/02

Т воздуха TANS, Град С

Т охлажд. Жидкости TMOT, Град С

Напряжен. Бортсети UBSQ, B

Положение педали. WPED, %

Полож. Дросселя WDKBA, %

Требуемые обороты NSOL, Об/мин

Обороты двигателя NMOT, Об/мин

Расход воздуха Ml, Кг/ч

Фактор барокоррекции FHO

Время впрыска TIEFF, мсек

Адаптация регулировки х/х DMVAD, %

Вых. сигн. с датч. кислорода 1 USVKL, В

Вых. сигн. с датч. кислорода 2 USHKL, В

Kоэф. кор. l FR_w

Коэф. адапт. l FRA_w

Продувка адсорбера TATEOUT, %

Коэф. адап топлива. на х. х. MSLEAK, кг

перетечки на х. х. MSNDKO, кг/ч

Период 1-го датч. Кислорода DTPPSVKMF, сек

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


Настройка браузера на прием файлов cookie

Существует множество причин, по которым файл cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее распространенные причины:

  • В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки браузера, чтобы принять файлы cookie, или спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
  • Ваш браузер спрашивает, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файл cookie.
  • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Попробуйте другой браузер, если вы подозреваете это.
  • Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы это исправить, установите правильное время и дату на своем компьютере.
  • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Предоставить доступ без файлов cookie потребует от сайта создания нового сеанса для каждой посещаемой вами страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в файле cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только та информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, если вы не решите ввести его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступ к остальной части вашего компьютера, и только сайт, создавший файл cookie, может его прочитать.

Быстрая и гибкая обработка больших стеков изображений FRET с использованием набора инструментов FRET-IBRA

Abstract

Ратиометрический покадровый FRET-анализ требует надежного и точного конвейера обработки для устранения систематической ошибки в измерениях интенсивности флуоресцентных изображений перед проведением дальнейшего количественного анализа. Такой уровень надежности может быть достигнут только путем дополнения автоматизированных инструментов встроенной гибкостью для ручных специальных настроек. FRET-IBRA — это модульный и полностью распараллеленный инструмент на основе файла конфигурации, написанный на Python.Это упрощает конвейер обработки FRET для получения точных, зарегистрированных и унифицированных стеков изображений с соотношением сторон. Гибкость этого инструмента для обработки прерывистых последовательностей кадров изображения с индивидуальными параметрами конфигурации еще больше упрощает обработку выбросов и изменяющихся во времени эффектов в исходных микроскопических изображениях. FRET-IBRA предлагает кластерное вычитание фона канала, коррекцию фотообесцвечивания и построение изображения соотношения в комплексном решении без необходимости использования нескольких приложений, преобразования формата изображения и/или подключаемых модулей.Пакет принимает различные входные форматы и выводит стеки изображений TIFF вместе с показателями производительности для определения как качества, так и отказа алгоритма вычитания фона для каждого кадра. Кроме того, FRET-IBRA выводит изображения с превосходным отношением сигнал-шум и точностью по сравнению с существующими решениями для вычитания фона, сохраняя при этом быстрое время выполнения. Мы широко использовали пакет FRET-IBRA для количественной оценки пространственного распределения ионов кальция во время роста пыльцевых трубок в условиях механических ограничений.Сравнение с существующими инструментами ясно демонстрирует потребность в FRET-IBRA для извлечения надежной информации из изображений FRET-микроскопии динамических физиологических процессов с высоким пространственным и временным разрешением. Исходный код для операционных систем Linux и Mac выпущен под лицензией BSD и вместе с инструкциями по установке, тестовыми изображениями, примерами файлов конфигурации и пошаговым руководством находится в свободном доступе на github.com/gmunglani/fret- ибра.

Резюме автора

FRET — это фундаментальный метод визуализации, используемый для генерации флуоресцентных сигналов, чувствительных к молекулярным конформациям и взаимодействиям.Несмотря на его широкое использование и большое количество литературы по теоретическим шагам, необходимым для обработки изображений, созданных в результате этой процедуры, нам не удалось найти инструмент, который охватывал бы весь рабочий процесс обработки, в то же время позволяя пользователю гибко настраивать параметры для максимальной точности и удобства. эффективность во время выполнения. Таким образом, FRET-IBRA был создан как универсальное параллельное решение с открытым исходным кодом для обработки изображений FRET, устраняющее при этом сложности, возникающие из-за повторяющихся преобразований формата изображения.Помимо улучшения алгоритма вычитания фона для изображений FRET, для пользователей было реализовано несколько дополнительных опций для улучшения качества сигнала для их конкретного случая использования. FRET-IBRA в первую очередь создан для обеспечения гибкости при работе с большими стеками изображений за счет поддержки независимой обработки последовательностей кадров изображений, что значительно сокращает время, затрачиваемое на разделение и объединение стеков изображений. В тестах точности и скорости по сравнению с более общими пакетами вычитания фона FRET-IBRA смог предоставить самые чистые результаты с быстрым временем выполнения, что привело к надежному анализу без дополнительной настройки.

Образец цитирования: Munglani G, Vogler H, Grossniklaus U (2022) Быстрая и гибкая обработка больших стеков изображений FRET с использованием набора инструментов FRET-IBRA. PLoS Comput Biol 18(4): е1009242. https://doi.org/10.1371/journal.pcbi.1009242

Редактор: Дина Шнейдман-Духовны, Еврейский университет в Иерусалиме, ИЗРАИЛЬ

Получено: 25 июня 2021 г .; Принято: 16 февраля 2022 г .; Опубликовано: 4 апреля 2022 г.

Авторское право: © 2022 Munglani et al.Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Исходный код для операционных систем Linux и Mac выпущен под лицензией BSD и вместе с инструкциями по установке, тестовыми образами, примерами файлов конфигурации и пошаговым руководством находится в свободном доступе на github. .com/gmunglani/fret-ibra.

Финансирование: Эта работа была поддержана Цюрихским университетом (UG), Проектом исследований и развития технологий MecanX компании SystemsX.ch, Швейцарской инициативой в области системной биологии (UG) и, частично, Швейцарским национальным Грант Научного фонда CR22I2_166110 (UG). Спонсоры не участвовали в разработке исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Это документ PLOS Computational Biology Software.

Введение

Ратиометрические биосенсоры на основе FRET (резонансной передачи энергии Фёрстера) часто используются для количественной оценки динамики физиологических процессов с субклеточным разрешением. Было разработано несколько методологий для оптимизации калибровки этих протоколов [1, 2], но объем генерируемых данных по-прежнему требует быстрых, масштабируемых и гибких программных инструментов для эффективного и надежного анализа.

Точные ретроспективные алгоритмы вычитания фона и коррекции фотообесцвечивания имеют решающее значение для извлечения точных пространственно-временных распределений интенсивности пикселей из изображений с интервальной съемкой. Это особенно актуально для исследований, основанных на анализе временных рядов концентраций ионов, связанных с кинематикой клеток [3]. Присущая одному эксперименту изменчивость в более длительных временных масштабах требует использования эвристически определенных параметров процесса, которые могут применяться к конкретным разбиениям данных, а не ко всему стеку изображений, для борьбы с временным дрейфом [4].

Несколько алгоритмов были реализованы как автономные пакеты или в рамках существующих инструментов ( ImageJ , CellProfiler и qTfy ) для облегчения эффективной обработки различных методов микроскопических изображений. Традиционные методы, как правило, очень надежны и широко применимы, но часто используют статический набор параметров процесса, который непросто настроить для специализированных приложений [5–7]. Для повышения точности был разработан ряд высокопроизводительных алгоритмов, предназначенных для ретроспективного вычитания фона в изображениях световой микроскопии с использованием методов кластеризации и условной минимизации.Однако было показано, что они в целом непригодны для характеристики растущих клеток с помощью покадровых изображений, которые демонстрируют высокую временную корреляцию [4, 8–10].

В этой работе мы описываем FRET-IBRA (рациометрический анализ с вычитанием фона изображения), полностью распараллеленный инструмент на основе файла конфигурации, разработанный для упрощения логометрического анализа стеков изображений FRET [11]. FRET-IBRA принимает стеки TIFF с несколькими изображениями с разной разрядностью (8, 12 и 16 бит) в качестве входных данных и выводит стеки TIFF с несколькими изображениями и HDF5 для дальнейшего последующего анализа.Для обеспечения максимальной гибкости этот инструмент включает в себя обработку прерывистых кадров в стеке изображений, а также коррекцию отдельных кадров с оптимальными параметрами для минимизации временного шума. Следует отметить, что описанный здесь логометрический подход ограничен связанными конструкциями флуоресцентных белков, где сохраняется пиксельная стехиометрия. Чтобы продемонстрировать эффективность этого инструмента, FRET-изображения растущих пыльцевых трубок Arabidopsis thaliana обрабатываются для создания стопок соотношений для оценки пространственного распределения ионов кальция, стимулирующих рост.

Дизайн и реализация

Описание

FRET-IBRA состоит из трех модулей, которые отвечают за (i) вычитание фона акцепторных и донорных цейтраферных изображений, (ii) необязательную регистрацию и выравнивание этих обработанных стеков изображений в случае использования установки двойного просмотра для производить изображения соотношения и (iii) коррекцию фотообесцвечивания, соответственно (рис. 1A). Кроме того, инструмент выводит несколько показателей для оценки производительности алгоритма вычитания фона на отдельных кадрах, что позволяет быстро обнаруживать и повторно обрабатывать неоптимально обработанные кадры.Также предусмотрены возможности ведения журнала и хранения HDF5 для обеспечения воспроизводимости.

Рис. 1. Рабочий процесс FRET-IBRA.

A) Эволюция изображения от исходного изображения к изображению с коррекцией фона и окончательному логометрическому изображению. B) Контурная карта интенсивностей пикселей исходного и исправленного изображений. C) Распределение интенсивности пикселей для примера плиток фона и переднего плана, показанных на B), вместе с уменьшенным пространством признаков, показывающим медиану, асимметрию и дисперсию, где каждая точка представляет плитку.Синий кластер указывает на плитки фона, а красный кластер указывает на плитки переднего плана. D) Процент пикселей переднего плана можно использовать для управления качеством вычитания фона для каждого канала. E) Средняя интенсивность сигнала донорного и акцепторного каналов позволяет анализировать и корректировать эффекты обесцвечивания и служит дополнительным показателем качества для вычитания фона.

https://doi.org/10.1371/journal.pcbi.1009242.g001

Модули

Модуль вычитания фона разбивает кадр изображения на квадраты заданного размера и использует алгоритм кластеризации DBSCAN с евклидовой метрикой для идентификации плиток как переднего плана или фона (рис. 1B и 1C).Этот алгоритм адаптирован из работы Шварцфишера и его коллег (2011) [8] с использованием расширенного пространства признаков, которое включает медианный и высшие моменты (стандартное отклонение, асимметрия и эксцесс) распределения интенсивности пикселей тайлов вместе с положением их взвешенный по интенсивности центроид (рис. 1C). Интенсивность фрагментов фона используется для квадратичной интерполяции по всей сетке для оценки пространственно изменяющейся интенсивности фона, вызванной эффектами затенения. Результирующая интенсивность фона затем вычитается из исходного изображения (рис. 1В).Этот метод требует, чтобы для алгоритма DBSCAN в файле конфигурации был указан параметр настройки х . ϵ определяется как максимальное расстояние в пространстве признаков между двумя тайлами, классифицируемыми как один и тот же кластер. Этот алгоритм эффективен при коррекции пространственного затенения и удалении локального шума, а также обеспечивает точное вычитание фона для изображений с небольшим количеством интересующих объектов, но оптимизирован для изображений с одной ячейкой. При работе с изображениями с очень низкой интенсивностью сигнала пользователи должны тщательно проверять исправленные изображения, прежде чем продолжить, поскольку очень слабые сигналы могут создавать артефакты (пример brachypodium_roots в репозитории FRET-IBRA).Этот модуль выводит анимацию покадровых показателей производительности алгоритма для визуальной проверки, а также отфильтрованный набор данных HDF5 и стеки изображений TIFF.

Модуль логометрической обработки содержит несколько необязательных шагов предварительной обработки перед созданием изображения соотношения. Регистрация изображений между стопками донора и акцептора сначала выполняется с помощью жесткого линейного преобразования, за которым следует применение билатерального сглаживающего фильтра с малым ядром. Затем пороговая обработка Оцу используется для бинаризации изображений, после чего особенности на границе изображения удаляются.Процент ненулевых (переднего плана) пикселей на кадр стеков донора и акцептора (рис. 1D) и отношение медианной интенсивности к битовой глубине (рис. 1E) представлены как количественная метрика производительности алгоритма по всему стеку изображений. . Резкие разрывы в этих показателях между последовательными кадрами могут указывать на то, что определенные кадры требуют повторной обработки с другим х . Рационометрические изображения, которые представляют соотношение стеков изображений акцептора и донора, сохраняются как набор данных HDF5 и стек изображений TIFF.

Коррекция фотообесцвечивания затем дополнительно выполняется на кадрах акцепторных и/или донорных стопок с использованием регуляризованной линейной или экспоненциальной аппроксимации средней интенсивности кадра (рис. 1E). Диапазон кадров, используемый для подгонки, указывается в файле конфигурации и применяется ко всем кадрам, начиная с начала фотообесцвечивания, определяемого как нижняя граница предоставленного диапазона кадров. Скорректированные логометрические изображения сохраняются в виде выходного стека изображений TIFF, а поправочные коэффициенты обесцвечивания сохраняются в наборе данных HDF5 для дальнейшего анализа, если это необходимо.

FRET-IBRA создан для обработки изображений с несколькими интересующими объектами, которые плотно упакованы, что позволяет точно оценить фон. Поскольку алгоритм вычитания фона классифицирует фрагменты исключительно как передний план или фон, изображения с широким пространственным однородным распределением ячеек или других интересующих объектов могут обрабатываться неправильно из-за плохой оценки фонового сигнала.

Результаты

Чтобы продемонстрировать эффективность FRET-IBRA, изображения FRET, показывающие распределение кальция в растущих пыльцевых трубках Arabidopsis thaliana , были скорректированы с помощью набора инструментов, и результат был сравнен с существующими инструментами вычитания фона, такими как BaSiC [10] и фоном. модуль вычитания пакета обработки изображений Mosaic [12] (рис. 2А).Параметр оптимального размера фонового окна в FRET-IBRA, определяющий, на сколько квадратных тайлов должно быть разделено изображение по ширине, для этого стека изображений определен равным 40. Этот параметр требует настройки на основе размеров элементов изображения, чтобы обеспечить точное извлечение переднего плана без использования чрезмерных вычислительных ресурсов. Кроме того, следует подчеркнуть, что чем больше количество тайлов, тем меньше размер тайла и тем больше время работы алгоритма вычитания фона.

Рис. 2. Сравнение FRET-IBRA с существующими плагинами для вычитания фона для ImageJ (BaSiC [10] и модуль вычитания фона из пакета Mosaic [12]).

A) Кадр 1 канала донора (CFP) после вычитания фона. Пунктирные линии обозначают ряды пикселей, проанализированных в B). B) Интенсивность пикселей после вычитания фона. Верхняя и нижняя панели соответствуют линиям 1 и 2 соответственно. C) Время выполнения для вычитания фона на 1000 кадров. Все тесты проводились на 4-ядерном процессоре Intel Core i7 (Dual-Core, 2.компьютер с тактовой частотой 8 ГГц, 16 ГБ ОЗУ).

https://doi.org/10.1371/journal.pcbi.1009242.g002

Как видно из двух строковых образцов интенсивности пикселей изображения на рис. 2B, FRET-IBRA является наиболее эффективным пакетом для вычитания интенсивности фоновых пикселей, в то время как поддержание значения пиковой интенсивности пыльцевой трубки. Кроме того, в дополнение к этому вычитанию фона, FRET-IBRA сглаживает результирующие интенсивности пикселей фона, уменьшая стандартное отклонение распределения фонового шума.С 4 ядрами время выполнения FRET-IBRA находится между BaSiC и Mosaic (рис. 2C). Однако, в отличие от других пакетов, параллельная реализация FRET-IBRA позволяет дополнительно сократить время выполнения, которое линейно масштабируется с увеличением числа ядер.

Показано, что инструмент BaSiC эффективен для коррекции затенения изображения по сравнению с оригиналом; однако средняя интенсивность фонового пикселя остается в основном неизменной (рис. 3). Напротив, модуль вычитания фона Mosaic успешно вычитает интенсивность фоновых пикселей, хотя стандартное отклонение результирующего фонового шума остается относительно высоким (таблица 1).Хотя размер окна для Mosaic был установлен на 35, следует отметить, что этот параметр не оказывает существенного влияния на точность этого инструмента.

Таблица 1. Статистика интенсивности пикселей после запуска алгоритма вычитания фона с переменными размерами окна.

Размер окна в FRET-IBRA определяет количество тайлов, на которые должна быть разделена ширина изображения, т. е. для изображения размером 640×480 пикселей размер окна, установленный равным 40, дает 40 окон по ширине и 30 окон по высоте ( 1200 окон с размером плитки 16х16 пикселей).Размер окна не может быть установлен для BaSiC. Параметры, используемые для нашего сравнения, отмечены желтым цветом.

https://doi.org/10.1371/journal.pcbi.1009242.t001

Рис. 3. Сравнение фонового вычитания.

Уровни фона согласно пунктирной линии 2 на рис. 2 после вычитания фона с помощью FRET-IBRA, BaSiC и Mosaic по сравнению с исходным изображением. Плагин BaSiC корректировал только затенение, а Mosaic и FRET-IBRA корректировали затенение и вычитали фон.В целом обработка изображения с помощью FRET-IBRA приводит к фону с наименьшей интенсивностью пикселей и стандартным отклонением.

https://doi.org/10.1371/journal.pcbi.1009242.g003

Затем для FRET-IBRA, BaSiC и Mosaic были созданы логометрические стеки изображений из обработанных акцепторных и донорных стеков (рис. 4). Полученные изображения пропорций были масштабированы для отображения полного 8-битного диапазона, и первый кадр, обработанный каждым инструментом, использовался для сравнения (рис. 4А).Фоновый сигнал на изображении отношения, обработанном BaSiC, был одинаково высоким, что в целом позволяло хорошо различать передний план и фоновый сигнал, за исключением ореола более низкой интенсивности, окружающего контур пыльцевой трубки (рис. 4A, верхняя панель). Визуально видно, что динамика (спектр сигнала) переднего плана страдает от высоких значений фона, что делает любой количественный анализ очень сложным. Изображение отношения, созданное Mosaic, было значительно лучше из-за высокого соотношения сигнал/шум входных изображений (рис. 4А, средняя панель).Приемлемая интенсивность фона, однако, была снижена из-за нерегулярного шума со случайными пиками высокой интенсивности, которые не могли быть полностью устранены с помощью дополнительной фильтрации, наряду с продолжающимся присутствием ореола вокруг контура пыльцевой трубки. В отличие от BaSiC и Mosaic, изображения соотношения, полученные после вычитания фона FRET-IBRA, показали низкий однородный фоновый сигнал, что привело к превосходному соотношению сигнал/шум без сильных артефактов и экстремальных выбросов (рис. 4А, нижняя панель).

Рис. 4. Обработка изображения соотношения.

A) Были обработаны и сопоставлены изображения акцептора и донора с вычитанием фона из изображений соотношений, полученных с помощью BaSiC, Mosaic и FRET-IBRA. Поверхностные графики, созданные из изображений соотношений, дают лучшее представление о качестве вычитания фона и соотношении сигнал-шум, достигаемом с помощью каждого программного обеспечения (вверху: BaSiC, в середине: Mosaic, внизу: FRET-IBRA). B) FRET-IBRA автоматически регистрирует и масштабирует изображение отношения с надежным масштабированием, чтобы выявить весь диапазон спектра сигнала.

https://doi.org/10.1371/journal.pcbi.1009242.g004

Из изображения, обработанного FRET-IBRA на рис. 4A, видно, что отображение полного 8-битного диапазона интенсивности сигнала не идеально для визуального представления динамика отображаемых уровней кальция. Причина в том, что даже один выброс с неожиданно высоким значением будет определять коэффициент масштабирования всего изображения. Эквивалент также возникает в нижней части диапазона сигнала переднего плана, что приводит к относительно узкой гистограмме интенсивности и плоскому изображению.Поэтому FRET-IBRA использует надежное масштабирование (10-90-й процентиль) значений интенсивности изображения отношения, чтобы выявить скрытую динамику интенсивности сигнала. Зарегистрированная и масштабированная версия изображения отношения четко демонстрирует высокое распределение ионов кальция на кончике с резким спадом за пределами области кончика. Как и ожидалось, информативность изображения отношения в значительной степени зависит от достижения надежного отношения сигнал-шум из входных стеков, что, в свою очередь, сильно зависит от алгоритма вычитания фона.

FRET-IBRA — это полностью распараллеленный, модульный и гибкий инструмент, обеспечивающий полное решение рабочего процесса для проведения логометрического анализа изображений FRET. Было показано, что пакет корректирует затенение, эффективно вычитает интенсивность фоновых пикселей и сглаживает фоновый шум более эффективно, чем аналогичные пакеты для изображений с небольшим количеством интересующих объектов. Кроме того, FRET-IBRA создает логометрические изображения и выполняет коррекцию фотообесцвечивания по модульному принципу, что позволяет эффективно настраивать параметры для больших наборов изображений.Следует отметить, что коррекцию обесцвечивания следует использовать с осторожностью, поскольку она может вызвать артефакты, такие как маскирование истинных изменений интенсивности сигнала или чрезмерная коррекция, приводящая к ложному увеличению интенсивности сигнала, если предоставленные методы устранения тренда не подходят. Поэтому иногда может быть целесообразно допустить общее затухание результирующего сигнала отношения, чтобы обнаружить кратковременные колебания. В качестве альтернативы коррекция обесцвечивания может быть выполнена с использованием других алгоритмов устранения тренда вне FRET-IBRA.Было показано, что результирующие изображения, полученные с помощью FRET-IBRA на FRET-изображениях растущих пыльцевых трубок, имеют высокое отношение сигнал-шум и отсутствие значительных артефактов, что позволяет проводить точный дальнейший количественный или качественный последующий анализ. Кроме того, гибкая природа FRET-IBRA позволяет легко обрабатывать и исправлять прерывистые кадры по отдельности, что потенциально приводит к значительной экономии времени. FRET-IBRA хорошо работает с различными протестированными флуорофорами, включая биосенсорные белки и флуоресцентные красители.Вычитание фона также может быть выполнено с использованием отдельных стеков.

Будущие направления

В то время как FRET-IBRA изначально создавался как инструмент командной строки, использующий параметры на основе файла конфигурации, классы, реализованные в Python3, являются модульными и могут быть легко интегрированы в более крупный конвейер анализа. В настоящее время ведутся дальнейшие разработки для обнаружения областей с высокой ратиометрической интенсивностью и отслеживания их изменяющейся во времени динамики.

Каталожные номера

  1. 1.Тадросс М., Парк С., Вирамани Б., Юэ Д. Надежные подходы к количественной логометрической визуализации FRET флуорофоров CFP/YFP под конфокальной микроскопией. Дж Микроск. 2009;233(1):192–204. пмид:19196425
  2. 2. Spiering D, Bravo-Cordero J, Moshfegh Y, Miskolci V, Hodgson L. Количественная логометрическая визуализация FRET-биосенсоров в живых клетках. Методы клеточной биологии. 2013; 114: 593–609. пмид:23931524
  3. 3. Даминели Д., Портес М., Фейхо Дж. Колебательные сигнатуры лежат в основе режимов роста в пыльцевых трубках Arabidopsis : вычислительные методы для оценки местоположения наконечника, периодичности и синхронизации в растущих клетках.J Опытный бот. 2017;68(12):3267–3281. пмид:28369603
  4. 4. Буггентин Ф., Марр С., Шварцфишер М., Хоппе П., Хильзенбек О., Шредер Т. и др. Автоматический метод надежного и быстрого обнаружения клеток на изображениях в светлом поле с помощью высокопроизводительной микроскопии. Биоинформатика BMC. 2013;14:297. пмид:240
  5. 5. Валби С., Каменский Л., Лю З., Риклин-Равив Т., Конери А., О’Рурк Э. и др. Набор инструментов для анализа изображений для высокопроизводительных анализов C. elegans. Нат Методы.2012;9(7):714–716. пмид:22522656
  6. 6. Сингх С., Брей М., Джонс Т., Карпентер А. Конвейер для коррекции освещения изображений для высокопроизводительной микроскопии. Дж Микроск. 2014;256(3):231–236. пмид:25228240
  7. 7. Hilsenbeck O, Schwarzfischer M, Skylaki S, Schauberger B, Hoppe P, Loeffler D, et al. Программные инструменты для отслеживания отдельных клеток и количественного определения клеточных и молекулярных свойств. Нац биотехнолог. 2016;34(7):703–706. пмид:27404877
  8. 8.Шварцфишер М., Марр С., Крумсик Дж., Хоппе П.С., Шредер Т., Тайс Ф.Дж. Эффективная нормализация флуоресцентного изображения для таймлапс-фильмов. В: Микроскопический анализ изображений с приложениями в биологии. Гейдельберг; 2011.
  9. 9. Смит К., Ли Ю., Пиччинини Ф., Чукс Г., Балаш С., Бевилаква А. и др. CIDRE: метод коррекции освещения для оптической микроскопии. Нат Методы. 2015;12(5):404–406. пмид:25775044
  10. 10. Пэн Т., Торн К., Шредер Т., Ван Л., Тайс Ф., Марр С. и др.Инструмент BaSiC для коррекции фона и затенения изображений оптической микроскопии. Нац коммун. 2017;8:14836. пмид:28594001
  11. 11. Burri J, Munglani G, Nelson B, Grossniklaus U, Vogler H. Количественная оценка механических сил и физиологических процессов, участвующих в росте пыльцевых трубок, с использованием микрофлюидики и микроробототехники. Нью-Йорк, штат Нью-Йорк: Springer US; 2020. с. 275–292.
  12. 12. Cardinale J. Вычитание фона на основе гистограммы для ImageJ. Технический отчет.2008.

FRET-меченые зонды миРНК для отслеживания сборки и разборки нанокомплексов миРНК

dc.contributor.author Алаби, Кристофер А.
dc.contributor.author Любовь, Кевин Т.
dc.contributor.author Сахай, Гаурав
dc.contributor.author Штуцман, Тина М.
постоянный ток.участник.автор Янг, Уитни Т.
dc.contributor.author Лангер, Роберт
dc.contributor.author Андерсон, Дэниел Гриффит
dc.date.accessioned 2013-07-02T16:15:16Z
dc.дата.доступно 2013-07-02T16:15:16Z
dc.дата.выдачи 2012-06
постоянный ток.Дата отправки 2012-03
dc.identifier.issn 1936-0851
dc.identifier.issn 1936-086X
dc.identifier.uri http://hdl.handle.net/1721.1/79407
dc.description.abstract Сборка, стабильность и своевременная разборка нанокомплексов коротких интерферирующих РНК (миРНК) могут влиять на эффективность доставки миРНК и молчания генов.Таким образом, дизайн новых зондов, которые могут измерять эти свойства без существенного нарушения нанокомплексов или их окружения, может облегчить изучение и дальнейшую разработку новых нанокомплексов siRNA. Здесь мы изучаем зонды миРНК, меченые резонансной передачей энергии Фёрстера (FRET), которые могут отслеживать сборку, стабильность и разборку нанокомплексов миРНК в различных средах. Зонд состоит из двух идентичных миРНК, каждая из которых помечена флуорофором. При образовании нанокомплекса флуорофоры, связанные с siRNA, локально агрегируются внутри нанокомплекса и подвергаются FRET.Ключевым преимуществом этого метода является то, что средство доставки (DV) не нужно маркировать, что позволяет охарактеризовать большое разнообразие наноносителей, некоторые из которых трудно или даже невозможно пометить. Мы демонстрируем доказательство концепции, измеряя сборку различных DV с siRNA, и показываем хорошее согласие с экспериментами по гель-электрофорезу. Вследствие того, что не нужно маркировать DV, мы можем определить биофизические параметры нанокомплексов, такие как внеклеточные кажущиеся константы диссоциации (KD) и период полураспада внутриклеточной разборки для нескольких внутренних и собственных коммерческих DV.Кроме того, отсутствие модификации DV позволяет проводить истинное прямое сравнение между DV, а также корреляцию между их биофизическими свойствами и молчанием генов. en_US
dc.description.sponsorship Национальные институты здравоохранения (США) (грант NIH R37-EB000244) en_US
dc.description.sponsorship Национальные институты здравоохранения (США) (грант NIH R01-CA132091) en_US
постоянный ток.description.sponsorship Национальные институты здравоохранения (США) (грант NIH R01-CA115527) en_US
dc.description.sponsorship Национальные институты здравоохранения (США) (постдокторская стипендия) en_US
dc.language.iso en_US
dc.publisher Американское химическое общество en_US
dc.relation.isversionof http://dx.doi.org/10.1021/nn3013838 en_US
dc.rights Статья доступна в соответствии с политикой издателя и может подпадать под действие закона США об авторском праве. Пожалуйста, обратитесь к сайту издателя для условий использования. en_US
dc.source Кристофер Алаби en_US
dc.title FRET-меченые зонды миРНК для отслеживания сборки и разборки нанокомплексов миРНК en_US
постоянный ток.тип Артикул en_US
dc.identifier.citation Алаби, Кристофер А., Кевин Т. Лав, Гаурав Сахай, Тина Штуцман, Уитни Т. Янг, Роберт Лангер и Дэниел Г. Андерсон. Зонды миРНК с меткой FRET для отслеживания сборки и разборки нанокомплексов миРНК. САУ Нано 6, нет. 7 (24 июля 2012 г.): 6133-6141. en_US
dc.contributor.department Гарвардский университет – Отдел медицинских наук и технологий Массачусетского технологического института en_US
постоянный ток.contributor.department Массачусетский технологический институт. Кафедра биологической инженерии en_US
dc.contributor.department Массачусетский технологический институт. Кафедра химического машиностроения en_US
dc.contributor.department Koch Institute for Integrative Cancer Research at MIT en_US
dc.contributor.approver Алаби, Кристофер Акинли en_US
постоянный ток.contributor.mitauthor Алаби, Кристофер А. en_US
dc.contributor.mitauthor Лав, Кевин Т. en_US
dc.contributor.mitauthor Сахай, Гаурав en_US
dc.contributor.mitauthor Штуцман, Тина М. en_US
dc.contributor.mitauthor Лангер, Роберт en_US
постоянный ток.contributor.mitauthor Андерсон, Дэниел Гриффит en_US
dc.relation.journal ACS Nano en_US
dc.eprint.version Окончательная версия рукописи автора en_US
dc.type.uri http://purl.org/eprint/type/JournalArticle en_US
eprint.status http://purl.org/eprint/status/PeerReviewed en_US
пространство.заказал авторов Алаби, Кристофер А.; С любовью, Кевин Т .; Сахай, Гаурав; Штуцман, Тина; Янг, Уитни Т .; Лангер, Роберт; Андерсон, Дэниел Г. en_US
dc.identifier.orcid https://orcid.org/0000-0002-2100-1171
dc.identifier.orcid https://orcid.org/0000-0001-5629-4798
dc.identifier.orcid https://orcid.org/0000-0003-4255-0492
пространство.mitauthor.error правда
мит.лицензия PUBLISHER_POLICY en_US
mit.metadata.status Завершено

Упрощенная калибровка прибора для широкопольной флуоресцентной резонансной передачи энергии (FRET), измеренная методом сенсибилизированного излучения с помощью метода сенсибилизированного излучения»,

аннотация = «Ферстеровский (или флуоресцентный) резонансный перенос энергии (FRET) представляет собой количественный перенос энергии, при котором донорный флуорофор безызлучательно передает свою энергию возбуждения акцепторному флуорофору.Изменение эффективности FRET указывает на изменение близости и окружения этих флуорофоров, что позволяет изучать межмолекулярные взаимодействия. Для измерения эффективности FRET с использованием метода сенсибилизированной эмиссии требуется калиброванная донорно-акцепторная система. Один из этих калибровочных факторов, называемый G-фактором, который зависит от параметров прибора, связанных с измерительными каналами донора и акцептора, а также от квантовой эффективности флуорофоров, может быть определен несколькими различными способами и позволяет преобразовывать исходные сигналы излучения донора и акцептора в FRET-эффективность.Однако рассчитанное значение G-фактора по экспериментальным данным может существенно колебаться в зависимости от выбранного экспериментального метода и размера выборки. В этой технической заметке мы расширяем результаты Gates et al. (Cytometry Part A 95A (2018) 201–213) путем уточнения метода калибровки, используемого для калибровки FRET на основе данных пикселей изображения. Вместо использования пиксельных гистограмм двух конструкций с высокой и низкой эффективностью FRET для определения G-фактора мы используем данные пиксельной гистограммы из одной конструкции с известной эффективностью.Мы проверяем этот метод, определяя фактор G с помощью тех же конструкций, которые были разработаны и использованы Гейтсом и соавт. и сравнение результатов двух подходов. Хотя эти два подхода теоретически эквивалентны, мы демонстрируем, что использование одной конструкции с известной эффективностью обеспечивает более точное экспериментальное измерение фактора G, которое может быть достигнуто путем сбора меньшего количества изображений.»,

keywords = «FRET эффективность, калибровка, флуоресцентная микроскопия, метод на основе интенсивности, молекулярная визуализация»,

автор = «Одри Менэсс и Даниэль Сумецкий и Николас Эмануэли и Стейн, {Джереми Л.} и Гейтс, {Эван М.} и Хоффман, {Брентон Д.} и Бустани, {Нада Н.}»,

примечание = «Информация о финансировании: авторы благодарят доктора Б.Л. Файрштейн и ее лабораторию в Рутгерсе за помощь в очистка плазмид ДНК, а также доктор Э. Уайт и Институт рака Рутгерса в Нью-Джерси для клеток iBMK, использованных в этом исследовании. Это исследование было частично поддержано грантом NSF CMMI-1825433 для N.N.B. и летняя стипендия для A.M. и Н.Е. из Университета Париж-Сакле.Э.МГ. поддерживается стипендией NSF для выпускников DGE-1644868 и грантом CMMI-1454257 для B.D.H. Авторские права издателя: {\textcopyright} 2020 International Society for Advancement of Cytometry»,

year = «2021»,

month = apr,

doi = «10.1002/cyto.a.24194»,

language = «English (США)»,

том = «99»,

страницы = «407—416»,

журнал = «Цитометрия. Часть А: журнал Международного общества аналитической цитологии»,

issn = «1552-4922»,

издатель = «Wiley-Liss Inc.»,

number = «4»,

}

Судьи Верховного суда США обеспокоены оскорбительными товарными знаками

ВАШИНГТОН (Рейтер) оскорбления в брендах и лозунгах, а также заботятся о защите только положительных слов.

Восемь судей выслушали аргументы по делу, касающемуся базирующейся в Портленде, штат Орегон, азиатско-американской танцевальной рок-группы под названием The Slants, которой было отказано в регистрации товарного знака на их имя, потому что правительство сочло это оскорбительным для лиц азиатского происхождения.Группа оспорила отказ как нарушение прав на свободу слова.

Дело, одно из наиболее пристально наблюдаемых в текущем сроке полномочий суда, может повлиять на еще один громкий спор по поводу отмены правительством товарных знаков Washington Redskins Национальной футбольной лиги за унижение коренных американцев.

Адвокат группы Джон Коннелл заявил судьям, что правительство не может использовать закон о товарных знаках для ограничения свободы слова и защиты слушателей от правонарушений.

«Не было никаких предположений, что это был закон о вежливости», — сказал судьям Коннелл.

Администрация Обамы подала апелляцию после того, как суд низшей инстанции согласился с мнением группы о том, что часть закона 1946 года, регулирующего федеральные товарные знаки, который запрещает те, которые могут унижать определенных людей, противоречит гарантии свободы слова Конституции США.

Судья Соня Сотомайор заявила, что никто не мешает группе называться и рекламировать себя как The Slants.

«Вы просите правительство подтвердить ваше имя» таким образом, который правительство предпочитает не делать, сказал Сотомайор.

Юридический спор группы начался, когда Управление по патентам и товарным знакам США отказало в предоставлении защиты товарного знака для имени The Slants в 2013 году. Некоторые считают это расовым оскорблением, относящимся к глазам азиатских людей.

Постановлением суда могут быть установлены параметры для регистрации товарных знаков, которые могут помочь защитить названия продуктов и компаний, а также коммерческие слоганы в суде и заблокировать ввоз и продажу контрафактных товаров.

Судья Энтони Кеннеди спросил адвоката группы Джона Коннелла, можно ли запретить группе неазиатов, использующих имя The Slants для насмешек над азиатами, зарегистрировать товарный знак.Коннелл сказал, что они не могут.

Кеннеди задался вопросом, следует ли рассматривать систему товарных знаков как общественный парк, «где вы можете сказать все, что хотите».

Судьи, похоже, согласились с группой в том, что правительство отдавало предпочтение одним товарным знакам и не одобряло другие, своего рода дискриминация, основанная на точке зрения, традиционно запрещенной Первой поправкой.

«КЛАССИЧЕСКОЕ ДЕЛО»

Судья Елена Каган сказала, что если бы правительство предоставляло товарные знаки только для положительных сообщений, таких как «все политики добродетельны», а не для отрицательных, таких как «все политики коррумпированы», это был бы «довольно классический случай дискриминация точек зрения.

Отклонив The Slants в качестве товарного знака, правительство зарегистрировало другие потенциально оскорбительные товарные знаки, такие как выпечка «Baked By a Negro», видеоролики для взрослых «Retardipedia» и «Boobs as Beer Holders», согласно судебным документам.

Судьи, похоже, боролись за то, разумен ли запрет оскорбительных оскорблений в системе товарных знаков, которая используется для продвижения торговли и определения происхождения товаров.

Фронтмен The Slants Саймон Тэм подал апелляцию на отказ правительства в регистрации товарного знака, заявив, что название было выбрано как способ вернуть этот термин и носить его как «знак гордости».

Апелляционный суд США по федеральному округу в Вашингтоне в 2015 году постановил, что положение Закона Лэнхема 1946 года о унижении достоинства является неконституционным.

От правительства не следует требовать одобрения товарных знаков, «содержащих грубые ссылки на женщин, основанные на частях их анатомии; самые отвратительные расовые оскорбления и лозунги сторонников превосходства белой расы; и унизительные иллюстрации пророка Мухаммеда и других религиозных деятелей», — заявила администрация Обамы в письменной записке в Верховный суд.

Несколько судей задались вопросом, как избежать проблем клеветы или клеветы, если оскорбительные товарные знаки никогда не могут быть отклонены. Ссылаясь на избранного президента Дональда Трампа, Сотомайор привел пример того, как кто-то зарегистрировал товарный знак со словами «Трамп — вор».

Даже если суд сочтет это клеветой, товарный знак все равно можно будет использовать, поскольку он будет защищен Первой поправкой, сказала она. «Это не имеет смысла, — сказал Сотомайор.

Судья Стивен Брейер заявил, что закон о товарных знаках не предназначен для того, чтобы провоцировать людей на споры, что вполне допустимо при официальной регистрации оскорблений и оскорблений.

Решение ожидается к концу июня.

В отдельном деле Redskins совет по товарным знакам в 2014 году аннулировал шесть товарных знаков команды по запросу активистов коренных американцев на том основании, что название команды унижает коренных американцев. Апелляция команды, также основанная на свободе слова, отложена в 4-м окружном апелляционном суде в Ричмонде, штат Вирджиния, до вынесения решения по делу The Slants.

Дело находится в Верховном суде США Мишель К.Ли против Саймона Шиао Тама, № 15-1293.

Разработка нового метода FRET для обнаружения Listeria или Salmonella

Были введены стандарты для регулирования содержания микробов и консервантов, чтобы гарантировать безопасность пищевых продуктов для потребителя. В случае вспышки заболевания, связанного с пищевыми продуктами, крайне важно иметь возможность быстро и точно обнаружить и определить причину заболевания. Кроме того, для ежедневного контроля содержания микробов и консервантов в пищевых продуктах методы обнаружения должны легко выполняться для многочисленных образцов пищевых продуктов.В настоящем исследовании изучались более быстрые альтернативные методы идентификации бактерий с помощью ДНК-фингерпринтинга. Метод проточной цитометрии был разработан как альтернатива гель-электрофорезу в пульсирующем поле, так называемому золотому методу. Определение размера фрагмента ДНК с помощью сверхчувствительного проточного цитометра позволяло различать виды и штаммы воспроизводимым способом, сравнимым с гель-электрофорезом в пульсирующем поле. Этот новый метод был в сотни раз быстрее и в 200 000 раз более чувствительным. Кроме того, был разработан еще один метод идентификации по ДНК-фингерпринту, основанный на полиморфизме длины амплифицированного фрагмента одного фермента (SE-AFLP).Этот метод позволил дифференцировать роды, виды и штаммы патогенных бактерий Bacilli, Staphylococci, Yersinia и Escherichia coli. Эти паттерны отпечатков пальцев, полученные с помощью SE-AFLP, было проще и легче анализировать, чем с помощью традиционного полиморфизма длины амплифицированного фрагмента с помощью двойного ферментативного расщепления. Низин (Е234) добавляют в качестве консерванта в различные виды пищевых продуктов, особенно в молочные продукты, во всем мире. Существуют различные методы обнаружения низина, но им не хватает чувствительности, скорости или специфичности.В настоящем исследовании был разработан чувствительный биологический анализ индуцированного низином зеленого флуоресцентного белка (GFPuv) с использованием двухкомпонентной сигнальной системы NisRK Lactococcus lactis и промотора nisA, индуцируемого низином. Биоанализ был чрезвычайно чувствительным с пределом обнаружения 10 пг/мл в культуральном супернатанте. Кроме того, он был совместим для количественного определения различных пищевых матриц, таких как молоко, заправки для салатов, плавленый сыр, жидкие яйца и консервированные помидоры. Вино обладает хорошими антимикробными свойствами из-за концентрации спирта, низкого pH и содержания органических веществ, поэтому его часто считают безопасным для употребления в отношении микробов.Другой целью этой диссертации было изучение микробиоты вин, возвращенных покупателями с жалобами на симптомы пищевого отравления. С помощью частичного анализа последовательности гена 16S рРНК, риботипирования и анализа подвижности сперматозоидов хряков было установлено, что одно из вин содержало Bacillus simplex BAC91, продуцирующее термостабильное вещество, токсичное для митохондрий сперматозоидов. Антибактериальную активность вина тестировали на вегетативных клетках и спорах B. simplex BAC91, штамме B. cereus типа ATCC 14579 и цереулид-продуцирующих B.цереус F4810/72. Хотя вегетативные клетки и споры B. simplex BAC91 были чувствительны к антимикробному действию вина, споры штаммов B. cereus ATCC 14579 и F4810/72 сохраняли жизнеспособность не менее 4 месяцев. Согласно этим результатам, Bacillus spp., точнее споры, могут представлять возможный риск для потребителя вина. Mikrobien ja säilöntäaineiden määrälle elintarvikkeissa on luotu ja asetettu raja-arvoja, jotta voidaan varmistaa kuluttajien turvallisuus. Erityisesti ruokamyrkytysepidemioissa на oleellista, että taudinaiheuttajat voidaan havaita ja tunnistaa mahdollisimman nopeasti ja tarkasti.Tämän lisäksi päivittäisessä mikrobien ja säilöntäaineiden seurannassa ja kontrolloinnissa käytettävien ilmaisutekniikoiden ja metodologioiden tulee olla helppokäyttöisiä. Tässä väitöskirjassa tutkittiin vaihtoehtoisia nopeampia mittausmenetelmiä bakteerien tunnistamiseen DNA-sormenjälkien avulla. Työssä kehitettiin virtaussytometriin perustuva menetelmä vaihtoehdoksi pulssikenttägeelielektroforeesille (золотой метод). DNA-palojen koon mittaaminen erittäin herkällä virtaussytometrillä mahdollisti lajien ja kantojen erottamisen toistettavalla ja vertailtavissa olevalla tavalla pulssikenttägeelielielektroforeesiin nähden.Uusi menetelmä oli satoja kertoja nopeampi ja 200,000 kertaa herkempi kuin vertailumenetelmä. Tämän lisäksi kehitettiin myös toinen DNA-sormenjälkitunnistusmenetelmä. Menetelmässä bakteerin DNA:ta pilkotaan yhdella entsyymillä ja syntyneitä DNA-paloja monistetaan erityisillä alukkeilla, jolloin syntyy kullekin bakteerille tunnusomainen sormenjälkikuvio. Tämä menetelmä mahdollisti patogeenibakteerien: Bacilli, Staphylococci, Yersinia, ja Escherichia coli sukujen, lajien ja kantojen erottamisen. Uudella menetelmällä sormenjälkikuviot olivat myös yksinkertaisempia ja helpompia analysoida kuin perinteisella menetelmällä, jossa käytetään kahta entsyymiä.Nisiiniä (E234) käytetään yleisesti säilöntäaineena erilaisissa elintarvikkeissa ja erityisesti maitotuotteissa ympäri maailmaa. Nisiinin määrittämiseen on olemassa erilaisia ​​mittausmenetelmiä, mutta ne eivät ole yleensä tarpeeksi herkkiä, spesifisiä ja nopeita. Tässä tutkimuksessa kehitettiin testi, jossa näytteen sisältämä nisiini osoitetaan reportterigeenin avulla. Testissä käytettiin Lactococcus lactis kanta, jolla on kromosomissa kaksikocomponenttisignaalijärjestelmä NisRK ja plasmidissa nisA-promoottori gfpuv reportterigeenin edessä.Nisiini aktivoi nisA-promoottorin NisRK-componentin välituksella, mikä saa aikaan reportterigeenin ja vihreän fluoresoivan proteiinin (GFPuv) ilmentymisen, joka voidaan mitata. Testi oli erittäin herkkä ja sillä pystyttiin havaitsemaan jopa 10 pg/ml nisiinipitoisuus kasvatusliemessä. Tämän lisäksi se oli sovellettavissa mittauksiin erilaisista elintarvikkeista, kuten maidosta, salaattikastikkeista, prosessoiduista juustoista,nestemäisistä kananmunista ja säilyketomaatista. Alkoholipitoisuus, alhainen pH-taso ja organanisen aineen pitoisuus antavat viinille hyvät antimikrobiset ominaisuudet, minkä vuoksi viiniä pidetään yleisesti mikrobien suhteen turvallisena elintarvikkeena.Tämän väitöskirjan yhtenä tavoitteena oli tutkia asiakkaiden palauttamia viinejä, joiden oletettiin olleen syynä ruokamyrkytysoireisiin. Osittaisen 16S rRNA geenisekvenssin analysoinnin, ribotyypityksen ja sian siittiöiden liikkuvuuskokeen avulla yhdestä viinistä löydettiin ja tunnistettiin Bacillus simplex BAC91 bakteeri, joka tuotti siittiösolujen mitokondrioihin my vaikuttavahin. Активный антимикробный агент mitattiin B. simplex BAC91, B. cereus ATCC 14579 (tyyppikanta) и kereulidi-myrkkyä tuottavan B.cereus F4810/72 bakteerien vegetatiivisilla soluilla ja itiöillä. Vaikka B. simplex BAC91 bakteerin vegetatiiviset solut ja itiöt olivat herkkiä viinin antimicrobisille ominaisuuksille, B. cereus tyyppikanta ATCC 14579 ja B. cereus F4810/72 -bakteereiden itiöt pysyivät pysyivät elossa ainakin ajan kuukauden kuukauden. Tulosten perusteella Bacillus spp. ja erityisesti niiden itiöt voivat olla mahdollinen Riski viinin kuluttajille.

Разработка FRET-анализа для создания платформ для количественного и высокопроизводительного скрининга межбелковых взаимодействий

Анализ спектра флуоресценции сигнала FRET

Константа диссоциации, K d , является важным параметром для характеристики белок-белковых взаимодействий.Основываясь на том факте, что сигнал FRET пропорционален количеству связанной пары FRET, мы разработали технологию на основе FRET для K . d определение. Мы считаем, что технология на основе FRET может обеспечить уникальные преимущества по сравнению с традиционными технологиями для K d определение, такое как BIAcore SPR или анализ связывания радиоактивно меченого лиганда. Технология FRET позволяет в режиме реального времени отслеживать взаимодействие белков даже в комплексе из нескольких белков.Приборы для измерения FRET широко доступны.15,22 Не требуется маркировка радиоизотопами, что обеспечивает экологически безопасный подход. Более того, концентрацию белка в системе можно точно определить по интенсивности флуоресцентного излучения и квантовому выходу.17

Мы выбрали путь SUMOylation в качестве модельной системы для разработки этой технологии, потому что этот путь включает множественные межбелковые взаимодействия,13 а также является хорошим потенциальным путем для открытия химических ингибиторов с помощью нашей технологии (см. ниже).Существует два уровня взаимодействия между SUMO1 и лигазой Е2, Ubc9: нековалентное и ковалентное взаимодействия (рис. 2а). Нековалентное физическое взаимодействие этих двух белков объединяет два белка без какой-либо активации SUMO. пептида SUMO с помощью его активирующего фермента E1. Для определения K d нековалентного взаимодействия SUMO1 и Ubc9 с помощью подхода FRET, мы выбрали пару FRET, CyPet и YPet, для обозначения SUMO1 и Ubc9 из-за их повышенной эффективности FRET.19 Длина волны возбуждения и излучения CyPet и YPet составляет около 414 и 475 нм, 515 и 530 нм соответственно. В частности, открытые рамки считывания CyPet и YPet сначала лигировали в pCRII-TOPO и сливали с SUMO1 и Ubc9 соответственно. Затем слитые гены CyPet-SUMO1 и YPet-Ubc9 лигировали в бактериальный вектор экспрессии pET28. Слитые белки с полигистидиновыми и флуоресцентными метками затем экспрессировали в E. coli и очищали на аффинной колонке Ni-NTA с последующей очисткой гель-фильтрацией ВЭЖХ.Внедрить технологию FRET для K d определение, необходимо решить два ключевых вопроса. Во-первых, нам нужно дифференцировать и количественно оценить сигнал флуоресценции FRET от других прямых сигналов флуоресценции донора и акцептора на длине волны возбуждения. Во-вторых, нам необходимо преобразовать сигналы флуоресценции в соответствующие концентрации связанных партнеров, донорных и акцепторных белков. Мы начали с общего закона действующих масс для межбелкового взаимодействия.

$$ {\text{SUMO}}1 + {\text{UBC}}9 \leftrightarrow {\text{SUMO}}1 {-} {\text{UBC}}9 $$

К d для этой пары можно рассчитать следующим образом: text{YPetUbc}}9]_{\text{бесплатно}} }}{{[{\text{CyPetSUMO}}1 \cdot {\text{YPetUbc}}9]}}} = {\frac{{[{ \text{CyPetSUMO}}1]_{\text{бесплатно}} [{\text{YPetUbc}}9]_{\text{бесплатно}} }}{{[{\text{YPetUbc}}9]_{ \text{связанный}} }}} $$

(1)

Затем мы разделяем флуоресцентные сигналы на длине волны 530 нм на три фракции: эмиссия FRET (Em FRET ), прямая эмиссия YPet и прямая эмиссия CyPet при возбуждении на длине волны 414 нм (уравнение2; Рис. 3а),

Рис. 3

Спектральный анализ сигналов FRET. (а) Разрез спектров излучения смеси CyPet–SUMO1 и YPet–Ubc9. (b) Спектр излучения по уравнениям YPet, используемым для определения сенсибилизированного излучения FRET, для преобразования интенсивности сенсибилизированного излучения в связанную концентрацию, для расчета концентрации свободного YPet-Ubc9 и сопоставления связанной концентрации со свободной концентрацией для получения K г значение

$$ {\text{Em}}_{\text{FRET}} = ({\text{Em}}_{\text{всего}} ) — {\text{CyPet}}({\text{cont }}) — {\text{YPet}}({\text{продолжение}}) $$

(2)

где CyPet(cont) – вклад в сигнал флуоресценции донора, YPet(cont) – вклад в сигнал флуоресценции акцептора.

Затем мы предположили и выяснили, что прямое излучение донора, CyPet, при 530 нм пропорционально его излучению при 475 нм при возбуждении на 414 нм с коэффициентом отношения x , в то время как прямое излучение акцептора, YPet , при 530 нм пропорциональна его излучению при 530 нм при возбуждении при 475 нм с коэффициентом отношения 90 674 и 90 675 (уравнение 3; рис. 3b).

$$ {\text{Em}}_{\text{FRET}} = ({\text{Em}}_{\text{всего}} ) — (x*{\text{FL}}_{ \text{DD}} ) — (y*{\text{FL}}_{\text{AA}} ) $$

(3)

, где FL DD представляет собой сигнал флуоресценции донора при возбуждении на длине волны донора (414 нм), а FL AA представляет собой сигнал флуоресценции акцептора при возбуждении на длине волны акцептора (475 нм).Из серии измерений различных концентраций одного CyPet или одного YPet мы определили x = 0,378 и y = 0,026.

K d Определение нековалентного взаимодействия SUMO1 и Ubc9 методом FRET

Для определения K d между SUMO1 и Ubc9, нам нужно преобразовать концентрации белка в функции интенсивности сигнала FRET и вывести его соотношение с K д .Поскольку общая концентрация CyPet-SUMO1 в нашем анализе фиксирована, формула K d (уравнение 1) может быть выражено как:

$$ \begin{aligned} K_{\text{d}} & = {\frac{{\{ [{\text{CyPetSUMO}}1]_ {\text{всего}} — [{\text{YPetUbc}}9]_{\text{связанно}} \} [{\text{YPetUbc}}9]_{\text{бесплатно}} }}{{ [{\ text {YPetUbc}} 9] _ {\ text {bound}} }}} \\ & = {\ frac {{\ { [{\ text {YPetUbc}} 9] _ {\ text {bound max} } — [{\text{YPetUbc}}9]_{\text{связанный}} \} [{\text{YPetUbc}}9]_{\text{бесплатно}}}}{{[{\text{YPetUbc }}9]_{\text{bound}} }}} \\ \end{align} $$

(4)

Уравнение 4 можно преобразовать в следующее:

$$ [{\text{YPetUbc}}9]_{\text{bound}} = {\frac{{[{\text{YPetUbc}}9]_{\text {связанный макс}} [{\text{YPetUbc}}9]_{\text{бесплатно}}}}{{K_{\text{d}} + [{\text{YPetUbc}}9]_{\text {бесплатно}} }}} $$

(5)

Поскольку интенсивность сигнала FRET (Em FRET ) пропорциональна концентрации связанного YPetUbc9 в смеси при всех других фиксированных параметрах, [YPetUbc9] связанный в каждом состоянии затем определяется интенсивностью сенсибилизированного излучения в линейной зависимости :

$$ [{\text{YPetUbc}}9]_{\text{bound}} = [{\text{YPetUbc}}9]_{\text{bound max}} *{\frac{{{ \text{Em}}_{\text{FRET}} }}{{{\text{Em}}_{\text{FRET max}} }}} $$

(6)

Объединение уравнений.(5) и (6) дают:

$$ {\text{Em}}_{\text{FRET}} = {\text{Em}}_{\text{FRET max}} *{\frac{ {[{\text{YPetUbc}}9]_{\text{бесплатно}}}}{{K_{\text{d}} + [{\text{YPetUbc9}}]_{\text{бесплатно}}} }} $$

(7)

Если мы установим общую концентрацию CyPet-SUMO1 на константу a , а концентрацию общего и свободного YPet-Ubc9 на переменные X и Y соответственно, мы можем преобразовать концентрацию связанного YPet-Ubc9 и бесплатно CyPet–SUMO1 по:

$$ [{\text{YPetUbc}}9]_{\text{bound}} = X — Y $$

(8)

$$ [{\text{CyPetSUMO}}1]_{\text{free}} = a — [{\text{YPetUbc}}9]_{\text{bound}} = a — X + Y $$

(9)

На основе определения K d и уравнения.{2} + 4K _{\text{d}} X} }}}} \right) $$

(11)

Таким образом, подгоняя набор данных Em FRET и общую концентрацию YPet-Ubc9 ( X ) с уравнением. (11) мы сможем получить значение максимума Em FRET (Em FRETmax ) и K д .

Перед тем, как мы измерили сигналы FRET между CyPet-SUMO1 и YPet-Ubc9, мы сначала охарактеризовали потенциальное интерференционное взаимодействие меток, используемых в нашем анализе, poly-His, CyPet и YPet, поскольку сообщалось, что CyPet и YPet могут иметь слабую димеризацию. активность сами по себе.Мы хотели бы знать о любой потенциальной близости взаимодействия от этих тегов. Дозозависимое увеличение сигнала FRET наблюдалось для CyPet-SUMO1 и YPet-Ubc9, в то время как в контрольных парах все с поли-His-меткой, CyPet и YPet, CyPet и YPet-Ubc9 или CyPet-SUMO1 и YPet не показали каких-либо значительных изменений. Сигналы FRET в пределах экспериментальной концентрации (рис. 4а). Эти результаты показывают, что в наших экспериментальных условиях эти метки не будут сами по себе формировать диммер и, следовательно, создавать помехи для K d измерение SUMO1 и Ubc9.

Рисунок 4

Определение сродства взаимодействия K d между CyPet–SUMO1 и YPet–Ubc9 с использованием технологии FRET. (а) Специфичность взаимодействия и количественный анализ среди пар. (b) График эмиссии YPet-Ubc9, сенсибилизированной FRET, в зависимости от общей концентрации YPet-Ubc9

В нашем К В эксперименте по определению d мы зафиксировали концентрацию CyPet–SUMO1 на уровне 1  мк М и увеличили концентрацию YPet–Ubc9 с 0 до 4  мк М в общем объеме 30 мк л.Затем спектры флуоресценции смеси определяли с помощью FlexstationII 384 при длине волны возбуждения 414 нм (рис. 2b) или 475 нм (данные не показаны). После того, как была рассчитана интенсивность излучения FRET при каждом условии, набор данных Em FRET и [YPetUbc9] всего был подогнан в уравнение. (11) методом наименьших квадратов с константой a , зафиксированной на 1 (рис. 4b). Мы получили Em FRETmax (2,38 ± 0,05) × 10 5 RFU и K . д из 0.33 ± 0,04 μ M, что сравнимо с ранее опубликованными результатами Martin et al. 17 (0,59 ± 0,09 мк М) и Tatham et al. 26 (0,25 ± 0,07 мк М).

K d Определение нековалентного взаимодействия SUMO1 и Ubc9 с помощью SPR

Для подтверждения наших результатов K d измерение из анализа FRET, затем мы измерили аффинность взаимодействия CyPet-SUMO1 и YPet-Ubc9 с помощью SPR.CyPet-SUMO1, меченный His, экспрессировали в бактериальных клетках и очищали с использованием шариков агарозы Ni-NTA. После диализа His-меченый CyPet-SUMO1 иммобилизовали на сенсорном чипе SPR NTA. YPet-Ubc9 был получен путем расщепления YPet-Ubc9 с His-меткой на гранулах Ni непосредственно путем расщепления тромбином. Затем расщепленный YPet-Ubc9 дополнительно очищали с помощью ВЭЖХ. Неспецифическое связывание YPet-Ubc9 с NTA-чипом вычитали, как описано в разделе «Материалы и методы». Анализ кинетики связывания показал реакцию связывания связанного CyPet-SUMO1 на серию инъекций различных концентраций YPet-Ubc9 (рис.5а). CyPet–SUMO1 с умеренной кинетикой связывается с YPet–Ubc9 с расчетной температурой K d из 0,35  μ М. Это K d соответствует K d из 0,33 ± 0,04 мк M определено с помощью анализа FRET, описанного выше.

Рисунок 5

Определение сродства взаимодействия K d по измерению поверхностного плазменного резонанса.(a) Определение K d между CyPet–SUMO1 и YPet–Ubc9 с использованием BIAcore, в результате чего K d  = 0,35  μ M. (b) Определение K d между SUMO1 и Ubc9 с использованием BIAcore, в результате чего тыс. d  = 0,10  мк М

Для дальнейшего анализа возможного вмешательства флуоресцентной метки во взаимодействие мы провели контрольный эксперимент в SPR.Было проанализировано взаимодействие SUMO1 и Ubc9 самих по себе. Подобно описанному выше эксперименту, меченный His SUMO1 был иммобилизован на сенсорном чипе NTA. Расщепленный Ubc9 очищали с помощью ВЭЖХ. Связанный SUMO1 демонстрирует реакцию связывания на серию инъекций различных концентраций Ubc9 с кинетикой, аналогичной кинетике слитых белков, меченных флуоресцентным белком (рис. 5b). К d взаимодействия SUMO1 и Ubc9 было рассчитано как 0,1 μ М, что сравнимо с таковым для меченных флуоресцентным белком SUMO1 и Ubc9.

Разработка клеточного анализа HTS

Хотя анализ FRET широко использовался в фундаментальных исследованиях, он не получил должного развития в формате HTS, особенно в клеточном HTS из-за высоких требований к высокому соотношению сигнал/шум. отношение и низкая вариация.4,24 Чтобы выяснить, можно ли превратить эту пару FRET в платформу HTS, мы пошли дальше, чтобы проверить, подходит ли этот анализ FRET для формата HTS или нет. В целом, большое количество соединений (> 100 000 соединений) и различных роботов, обычно участвующих в HTS, требуют воспроизводимых, маловариабельных и экономически эффективных биологических анализов.Для платформы скрининга на основе FRET идеальным анализом было бы использование клеточных линий, стабильно экспрессирующих пары флуоресцентных доноров и акцепторов, в которых сигналы FRET достаточно сильны, чтобы их можно было обнаружить с помощью инструментов HTS, таких как устройства для чтения планшетов.

Создание стабильных клеточных линий, экспрессирующих Cypet-SUMO1 и Ypet-Ubc9, для клеточного скрининга FRET

Для достижения высокой воспроизводимости, низкой изменчивости и низкой стоимости HTS была создана стабильная клеточная линия, экспрессирующая как Cypet-SUMO1, так и YPet-Ubc9. (раздел «Материалы и методы»).Вкратце, мы создали стабильную клеточную линию последовательным образом. Сначала мы ввели CyPet-SUMO1 в клетки HEK293 и отобрали клеточные линии с высоким уровнем экспрессии CyPet. Затем мы представили второго партнера, YPet–Ubc9. После второго отбора были отобраны отдельные стабильные колонии и исследованы их сигналы FRET (рис. 6а). Мы также создали контрольные клеточные линии, экспрессирующие только CyPet-SUMO1 отдельно и с другой парой YPet, такой как YPet-Aos1 для HTS и последующих анализов. Когда клетки возбуждали при 414 нм, мы обычно получали коэффициент эмиссии (Em 530 / Em 475 ) стабильных клеточных линий около 0.8–1,2 (рис. 6б), а у контрольной клеточной линии (CyPet–SUMO1) – 0,4–0,6. Типичные спектры стабильной клеточной линии и контрольных клеток были показаны на рис. 6b при возбуждении при 414 нм и на рис. 6c при возбуждении при 475 нм. Для дальнейшего подтверждения результатов мы также провели анализ FRET с измерениями изображений флуоресцентной микроскопии. Клетки, стабильно экспрессирующие CyPet-SUMO1/YPet-Ubc9, демонстрировали эмиссию флуоресценции в желтом канале при возбуждении на длине волны 442 нм, в то время как контрольные клетки, стабильно экспрессирующие CyPet-SUMO1, демонстрировали небольшую флуоресценцию в желтом канале при возбуждении на той же длине волны (рис.6г).

Рисунок 6

Характеристики стабильной клеточной линии для анализа FRET. ( а ) FRET-характеристика отдельных стабильных клеточных линий. (b) Спектр флуоресценции контрольных клеток, одиночной трансфицированной стабильной клеточной линии и двойной трансфицированной стабильной клеточной линии при возбуждении на длине волны 414 нм. (c) Спектр флуоресценции контрольных клеток, одиночной трансфицированной стабильной клеточной линии и двойной трансфицированной стабильной клеточной линии при возбуждении при 465 нм. (d) Анализ флуоресцентного изображения стабильных клеточных линий

Чтобы оценить динамический диапазон изменений сигнала FRET стабильной клеточной линии, чтобы оценить критерии скрининга, мы провели анализы разрушения SUMO1/Ubc9 с использованием детергента и/или мочевины, которые могли нарушать белок-белковые взаимодействия.Чтобы получить полный спектр сигналов FRET без взаимодействия пары FRET, мы исследовали спектр FRET стабильных клеток в PBS или лизированных клеток с использованием буфера для лизиса, содержащего 200 мМ NaCl, 10 мМ Трис с 1,0 % Triton X100 или буфер для лизиса плюс 1 М мочевины. Сигнал FRET уменьшался с 1,2 до 0,6 при использовании лизирующих буферов или лизирующего буфера с мочевиной (рис. 7а). Даже с 1 М мочевиной сигнал FRET больше не уменьшался, что указывает на то, что все взаимодействия CyPet-SUMO1/YPet-Ubc9 полностью нарушены.Динамический диапазон сигнала FRET от 1,2 до 0,6 отражает от полного взаимодействия до отсутствия взаимодействия CyPet-SUMO1 и YPet-Ubc9, которые будут использоваться в качестве критериев для скринингового захвата (рис. 7b и см. ниже пилотный скрининг).

Рисунок 7

Обратимое взаимодействие SUMO1 и Ubc9 в живых клетках. ( а ) Анализ FRET стабильной клеточной линии HEK293, содержащей CyPet-SUMO1 и YPet-Ubc9, после различных обработок с реагентами, нарушающими взаимодействие с белками, или без них, такими как Triton-100 или мочевина.(b) График отношения FRET (Em 530 /Em 475 ) клеток, обработанных с разрушающими буферами или без них, как в (a). (c) Положительный отбор семисот проверенных соединений

Разработка анализа в формате 384-луночных планшетов и пилотный скрининг

Для HTS требуется высокопредсказуемый и воспроизводимый анализ, а миниатюризация является важным шагом в разработке HTS.24 Таким образом, мы попытались разработать этот скрининг ингибитора Ubc9 на основе FRET последовательный анализ с высоким отношением сигнал-шум.В принципе, совпадение должно генерировать сигнал в анализе с достоверностью 95–99% в зависимости от экранов. Это означает, что попадание должно фиксироваться по его сигналу как минимум за пределами трех SD. Для достижения высокого качества HTS в качестве сигнала скрининга использовался логометрический сигнал FRET ( R = Em 530 нм / Em 475 нм ), а коэффициент вариации (CV) сигналов в формате 384-луночного планшета использовался как оценка вариации. Мы тестировали разное количество клеток/лунку и измеряли вышеуказанные параметры в разное время в разные дни.Были получены последовательные результаты. Рационометрический сигнал FRET ( R = Em 530 нм / Em 475 нм ) стабильной клеточной линии, экспрессирующей CyPet-SUMO1/YPet-Ubc9, составлял 1,14 ± 0,04. Сигнал контрольной стабильной клеточной линии, экспрессирующей CyPet-SUMO1, составил 0,54 ± 0,03. CV всех образцов были менее 10%, что соответствовало критерию требования HTS, 15%. Эти данные указывают на то, что отношение сигнал/шум довольно сильно различается с небольшими вариациями. Эти результаты предполагают, что скрининг ингибитора(ов) взаимодействия SUMO1-Ubc9 в 384-луночных планшетах возможен для HTS.

Чтобы проверить нашу платформу HTS на основе FRET, мы провели небольшой пилотный скрининг с частью доступных нам коллекций соединений. Мы проверили 2000 соединений и обнаружили, что среднее значение Em 530 /Em 475 равно 0,95, а стандартное отклонение (SD) равно 0,15.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.